【摘 要】
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通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库，克隆了人胰岛素基因组基因．首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组ＤＮＡ，用ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅡ对基因组ＤＮＡ进行全酶切，经０．４％琼脂糖凝胶电泳，特异回收９．５ｋｂ左右的ＤＮＡ片段．将该片段与λＥＭＢＬ３／ＢａｍＨⅠ臂连接，构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库（富集文库），效价为２×１０４．同时采用ＰＣＲ方法及用引物Ⅰ：５′ＧＧＡＣＡＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧ
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通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库，克隆了人胰岛素基因组基因．首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组ＤＮＡ，用ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅡ对基因组ＤＮＡ进行全酶切，经０．４％琼脂糖凝胶电泳，特异回收９．５ｋｂ左右的ＤＮＡ片段．将该片段与λＥＭＢＬ３／ＢａｍＨⅠ臂连接，构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库（富集文库），效价为２×１０４．同时采用ＰＣＲ方法及用引物Ⅰ：５′ＧＧＡＣＡＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＧＡＡＧＡＧＧ３′，引物Ⅱ：５′ＣＴＧＣＧＴＣＴＡＡＴＴＧＣＡＧＴＡＧＴＴＣ３′，从人基因组ＤＮＡ中扩增出一段含胰岛素基因的１．３６ｋｂＤＮＡ片段，做为放射性标记探针，对文库进行了噬菌斑原位杂交筛选，从１×１０４个噬菌斑中筛选到一个含人胰岛素基因组基因的阳性克隆，并进一步完成了亚克隆和该基因１７３２ｂｐＤＮＡ序列的测定．结果该基因的１７３２ｂｐＤＮＡ序列包括部分５′端和３′端与国外发表的人胰岛素α型等位基因的序列相同
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