【摘 要】
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为制备含有病毒性出血性败血症病毒（VHSV）N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS2
【机 构】
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山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【基金项目】
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“十二五”国家科技支撑项目(2013BAD12B02-03)
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为制备含有病毒性出血性败血症病毒（VHSV）N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS2his-N;将重组质粒pNH-MS2his-N转化至表达菌株BL21（DE3）,用1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化;对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性试验,使用数字PCR对病毒样颗粒进行定值。结果显示,该病毒样颗粒含VHSV N基因序列,并且稳定性良好,定值结果为8×106 copies/m L。结果表明,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。
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