【摘 要】
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将嗜麦芽寡养单胞菌BBE11-1来源的角蛋白酶基因kerD进行毕赤酵母密码子优化,构建重组载体pPIC9k-ker D;整合该重组载体到毕赤酵母SMD1168基因组,筛选到Mut~＋型重组子;对利用G4
【机 构】
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江南大学生物工程学院,江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(2011AA100905);国家自然科学基金项目(31470160);中国博士后科学基金特别资助项目(114957)
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将嗜麦芽寡养单胞菌BBE11-1来源的角蛋白酶基因kerD进行毕赤酵母密码子优化,构建重组载体pPIC9k-ker D;整合该重组载体到毕赤酵母SMD1168基因组,筛选到Mut~＋型重组子;对利用G418抗性筛选到的重组子进行甲醇诱导,筛选到产酶效果最好的重组菌株。纯化和SDS-PAGE检测表达的重组酶,研究重组酶的部分酶学性质,结果表明,重组酶的最适反应pH为10,最适反应温度为60℃。为进一步提高目的蛋白的产量,采用甲醇与山梨醇和甘露醇混合流加的策略,优化重组菌产角蛋白酶的发酵过程。结果表明,甲醇与
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