探讨姜黄素对系统性红斑狼疮(SLE)患者外泌体刺激后巨噬细胞吞噬能力的影响。
方法选取2016年2月至2017年11月广州市皮肤病防治所和中山大学孙逸仙纪念医院诊治的活动期SLE患者18例,健康对照18例。提取受试者血清外泌体,分为健康对照者外泌体(CON-exo)、SLE患者外泌体(SLE-exo)、CON-exo +姜黄素、SLE-exo +姜黄素用于刺激THP-1源性巨噬细胞,pHrodo™Red指示剂与巨噬细胞共孵育,流式细胞仪检测平均荧光强度,免疫荧光染色计算pHrodo™ Red阳性细胞比例,评价巨噬细胞吞噬功能。Western印迹法检测CON-exo组、SLE-exo组、SLE-exo +姜黄素(浓度分别为1、5、20 μmol/L)组CD14蛋白水平。两组比较使用Student-t检验,多组间对比采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。
结果流式细胞仪检测显示,CON-exo组、CON-exo +姜黄素组、SLE-exo组、SLE-exo +姜黄素组相对荧光强度分别为101.3% ± 14.05%、94.27 ± 14.13%、41.02% ± 9.54%、87.33% ± 15.01%,差异有统计学意义(F = 10.81,P < 0.01);免疫荧光染色pHrodo检测显示,阳性细胞比例分别为82.16% ± 5.20%、81.33% ± 4.51%、54.20% ± 9.31%、71.23% ± 5.43%,差异有统计学意义(F = 12.42,P < 0.01),SLE-exo组巨噬细胞荧光强度、阳性细胞比例均低于CON-exo组(t值分别为5.26、5.35,均P < 0.01)和SLE-exo +姜黄素组(t值分别为3.97、3.26,均P < 0.05)。Western印迹法显示,CON-exo组、SLE-exo组、SLE-exo +姜黄素(浓度分别为1、5、20 μmol/L)组细胞CD14蛋白水平分别为96.33% ± 13.65%、30.67% ± 5.86%、45.24% ± 8.89%、72.81% ± 6.62%、90.67% ± 12.66%,差异有统计学意义(F = 24.57,P < 0.01),SLE-exo组低于Con-exo组(t = 8.06,P < 0.001)和SLE-exo +姜黄素(5、20 μmol/L)(t值分别为5.08、7.38,均P < 0.001),随着姜黄素剂量增加,CD14水平有升高的趋势。
结论SLE患者外泌体明显抑制巨噬细胞吞噬功能,而姜黄素可逆转SLE患者外泌体的作用。