【摘 要】
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目的应用pET表达系统原核表达红色荧光蛋白变种mCherry，分析重组mCherry表达与荧光变化的关系，为其纯化及作为原核报告系统应用提供依据。方法根据GenBank中收录的mCherry氨基酸序列合成其编码基因，构建pET-mCherry表达质粒，转化入大肠埃希菌BL21(DE3)表达宿主。在不同诱导时间点，考察菌株荧光强度、mCherry表达量、培养上清液mCherry泄漏情况。诱导10 h
【机 构】
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518001 深圳市职业病防治院病理毒理科,510310 广州，广东药科大学公共卫生学院,518001 深圳市职业病防治院病理毒理科,518001 深圳市职业病防治院病理毒理科,518001 深圳市职
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目的应用pET表达系统原核表达红色荧光蛋白变种mCherry，分析重组mCherry表达与荧光变化的关系，为其纯化及作为原核报告系统应用提供依据。
方法根据GenBank中收录的mCherry氨基酸序列合成其编码基因，构建pET-mCherry表达质粒，转化入大肠埃希菌BL21(DE3)表达宿主。在不同诱导时间点，考察菌株荧光强度、mCherry表达量、培养上清液mCherry泄漏情况。诱导10 h后提取重组mCherry，利用荧光强度估算提取收率，并通过凝胶电泳分析提取液的蛋白纯度。
结果成功构建pET-mCherry表达载体，并在BL21(DE3)中得到高效诱导表达。荧光检出滞后于mCherry的表达，随诱导时间延长重组mCherry不断泄漏至培养液中。初步提取的重组mCherry纯度达到95%以上。
结论应用pET表达系统可高效表达mCherry，过表达mCherry可泄漏至胞外，方便其纯化。mCherry作为原核报告系统应用时，合理的诱导时间可能是关键影响因素。
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