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摘要：目的 建立十八味诃子利尿丸中没食子酸的高效液相色谱含量测定方法。方法 采用ODS-2 HYPERSIL C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（7∶93）；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃。结果 没食子酸对照品进样量在0.063～0.315 ?g范围内有良好的线性关系，Y﹦2902.1X-5.95，r=0.999 6，平均回收率为98.56%，RSD=0.41%（n=5）。结论 本法灵敏、简便、准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。
关键词：十八味诃子利尿丸；没食子酸；高效液相色谱法；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.018
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0049-02
十八味诃子利尿丸收载于《卫生部药品标准·藏药》第一册，由诃子、红花、豆蔻、渣驯膏、山矾叶、紫草茸、藏茜草、余甘子、姜黄、小檗皮、蒺藜、金礞石、刺柏膏、小伞虎耳草、巴夏嘎、刀豆、熊胆、人工牛黄组成，是根据藏医理论和长期临床经验，经反复筛选验证总结出的具有益肾固精、利尿功效的方药，临床主要用于肾病、腰背疼痛、尿频、小便混浊、糖尿病、遗精等病症[1]。原标准中的检验项目只有丸剂的常规项，为了进一步控制制剂质量，本试验采用高效液相色谱法（HPLC）对十八味诃子利尿丸中君药诃子的有效成分没食子酸进行含量测定。现报道如下。
1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪：包括LC-20AT四元泵，SPD-20A检测器，LC-20A HPLC系统化学工作站；十万分之一电子天平（CP-225D型）；KH-250DB型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
没食子酸对照品（批号110831-200803），中国药品生物制品检定所；十八味诃子利尿丸样品由甘南州佛阁藏药有限公司提供，批号120401、120501、120601、120701、120801；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：ODS-2 HYPERSIL C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（7∶93）；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃[2]。
2.2 对照品溶液的制备
精密称定没食子酸对照品5.25 mg，置50 mL量瓶中，加50%
甲醇溶液溶解并稀释至刻度，超声处理（功率300 W，频率40 kHz） 10 min，放至室温，作为对照品储备溶液；精密吸取上述对照品储备溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，作为对照品溶液（每1 mL含没食子酸31.5 ?g）[2]。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品粉末0.111 2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz） 30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2]。
2.4 阴性对照溶液的制备
取按处方比例混合的缺诃子的自制样品2 g，按供试品溶液的制备方法操作，即得。
2.5 专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图1。
2.6 线性关系考察
精密吸取上述对照品储备溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10 ?L，即相当于没食子酸0.063、0.126、0.189、0.252、0.315 ?g按“2.1”项下色谱条件，测定峰面积积分值。以对照品进样量（?g）为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=2902.1X-5.95，r=0.999 6。结果表明没食子酸对照品进样量在0.063～0.315 ?g范围内具有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取“2.2”项下对照品溶液，在确定的色谱条件下进样10 ?L，重复进样6次，测定峰面积积分平均值为159 289.2，RSD=0.39%。表明精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号120601）10 ?L，分别在0、4、8、12、24 h进样，结果平均含量为12.577 mg/g，RSD=0.47%，表明被测样品在24 h内稳定性较好。
2.9 重复性试验
取同一批号样品（批号120601，含量为12.661 mg/mL）6份，按“2.3”项下方法提取得到供试品溶液，进样测定，结果平均含量为12.661 mg/g，RSD=0.42%，表明方法重复性较好。
2.10 加样回收率试验
取已知含量的样品（批号120601）6份，各加入一定量的对照品储备溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，吸取10 ?L进样测定，计算回收率，结果见表1。
2.11 样品测定
按供试品溶液制备方法制备3批供试品溶液，分别取对照品溶液和供试品溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，按外标法计算被测样品中没食子酸的含量，结果见表2。
3 讨论
十八味诃子利尿丸中的君药诃子主要含没食子酸，具有抗氧化和抑菌作用[3]。本试验将诃子的有效成分没食子酸作为定量指标，对进一步提高十八味诃子利尿丸的质量具有重要意义。本试验供试品的制备依次采用了15%、25%、50%、75%甲醇，超声20、30、40、50 min提取，结果50%甲醇超声30 min提取，效果最佳。本方法灵敏、简便，过程容易控制，重复性好，稳定性强，阴性对照无干扰，可作为进一步提高十八味诃子利尿丸质量的方法。
参考文献：
[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：藏药第一册[S].1995：184.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：955.
[3] 王双，王昌涛，都晓伟.诃子中活性物质的提取及其抗氧化、抑菌作用研究[J].营养与功能，2010，26（6）：70-74.
（收稿日期：2013-05-11，编辑：陈静）
关键词：十八味诃子利尿丸；没食子酸；高效液相色谱法；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.018
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0049-02
十八味诃子利尿丸收载于《卫生部药品标准·藏药》第一册，由诃子、红花、豆蔻、渣驯膏、山矾叶、紫草茸、藏茜草、余甘子、姜黄、小檗皮、蒺藜、金礞石、刺柏膏、小伞虎耳草、巴夏嘎、刀豆、熊胆、人工牛黄组成，是根据藏医理论和长期临床经验，经反复筛选验证总结出的具有益肾固精、利尿功效的方药，临床主要用于肾病、腰背疼痛、尿频、小便混浊、糖尿病、遗精等病症[1]。原标准中的检验项目只有丸剂的常规项，为了进一步控制制剂质量，本试验采用高效液相色谱法（HPLC）对十八味诃子利尿丸中君药诃子的有效成分没食子酸进行含量测定。现报道如下。
1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪：包括LC-20AT四元泵，SPD-20A检测器，LC-20A HPLC系统化学工作站；十万分之一电子天平（CP-225D型）；KH-250DB型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
没食子酸对照品（批号110831-200803），中国药品生物制品检定所；十八味诃子利尿丸样品由甘南州佛阁藏药有限公司提供，批号120401、120501、120601、120701、120801；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：ODS-2 HYPERSIL C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（7∶93）；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃[2]。
2.2 对照品溶液的制备
精密称定没食子酸对照品5.25 mg，置50 mL量瓶中，加50%
甲醇溶液溶解并稀释至刻度，超声处理（功率300 W，频率40 kHz） 10 min，放至室温，作为对照品储备溶液；精密吸取上述对照品储备溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，作为对照品溶液（每1 mL含没食子酸31.5 ?g）[2]。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品粉末0.111 2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz） 30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2]。
2.4 阴性对照溶液的制备
取按处方比例混合的缺诃子的自制样品2 g，按供试品溶液的制备方法操作，即得。
2.5 专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图1。
2.6 线性关系考察
精密吸取上述对照品储备溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10 ?L，即相当于没食子酸0.063、0.126、0.189、0.252、0.315 ?g按“2.1”项下色谱条件，测定峰面积积分值。以对照品进样量（?g）为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=2902.1X-5.95，r=0.999 6。结果表明没食子酸对照品进样量在0.063～0.315 ?g范围内具有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取“2.2”项下对照品溶液，在确定的色谱条件下进样10 ?L，重复进样6次，测定峰面积积分平均值为159 289.2，RSD=0.39%。表明精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号120601）10 ?L，分别在0、4、8、12、24 h进样，结果平均含量为12.577 mg/g，RSD=0.47%，表明被测样品在24 h内稳定性较好。
2.9 重复性试验
取同一批号样品（批号120601，含量为12.661 mg/mL）6份，按“2.3”项下方法提取得到供试品溶液，进样测定，结果平均含量为12.661 mg/g，RSD=0.42%，表明方法重复性较好。
2.10 加样回收率试验
取已知含量的样品（批号120601）6份，各加入一定量的对照品储备溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，吸取10 ?L进样测定，计算回收率，结果见表1。
2.11 样品测定
按供试品溶液制备方法制备3批供试品溶液，分别取对照品溶液和供试品溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，按外标法计算被测样品中没食子酸的含量，结果见表2。
3 讨论
十八味诃子利尿丸中的君药诃子主要含没食子酸，具有抗氧化和抑菌作用[3]。本试验将诃子的有效成分没食子酸作为定量指标，对进一步提高十八味诃子利尿丸的质量具有重要意义。本试验供试品的制备依次采用了15%、25%、50%、75%甲醇，超声20、30、40、50 min提取，结果50%甲醇超声30 min提取，效果最佳。本方法灵敏、简便，过程容易控制，重复性好，稳定性强，阴性对照无干扰，可作为进一步提高十八味诃子利尿丸质量的方法。
参考文献：
[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：藏药第一册[S].1995：184.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：955.
[3] 王双，王昌涛，都晓伟.诃子中活性物质的提取及其抗氧化、抑菌作用研究[J].营养与功能，2010，26（6）：70-74.
（收稿日期：2013-05-11，编辑：陈静）