【摘 要】
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目的：构建人ENO1（human Enolase-α）基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白的表达,利用纯化后的蛋白制备具有活性的ENO1多克隆抗体.方法：用PCR方法从胃癌MKN45细胞全基因组中扩增出目
【机 构】
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兰州大学第一临床医学院,兰州大学第一医院肿瘤外科,兰州大学结核病研究中心
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目的：构建人ENO1（human Enolase-α）基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白的表达,利用纯化后的蛋白制备具有活性的ENO1多克隆抗体.方法：用PCR方法从胃癌MKN45细胞全基因组中扩增出目的基因ENO1,将目的基因和原核表达载体pET30a（＋）分别双酶切,回收酶切产物并用T4连接酶连接,获得重组质粒pET30a（＋）-ENO1.将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,利用纯化的ENO1活性蛋白作为抗原免疫家兔,制
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