套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zichou133

【摘要】

：

为了检测样品中的微量隐孢子虫,从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA用作初始PCR(Initial-PCR)模板,以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR(Nested-PCR),

【作者】

：

王权周金林钱应娟陈永军张惠英周勇志王永康徐新红

【机构】

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中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,上海市畜牧兽医站

【出处】

：

畜牧兽医学报

【发表日期】

：

2002年6期

【关键词】

：

套式PCR检测奶牛粪便隐孢子虫 NestedPCRCryptosporidium murisFecal

【基金项目】

：

上海市科技兴农科技攻关项目

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为了检测样品中的微量隐孢子虫,从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA用作初始PCR(Initial-PCR)模板,以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR(Nested-PCR),用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物,扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段.PCR产物经电泳鉴定,可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段,而阴性对照不能扩增目的片段;初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个/g粪便.初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为1

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