【摘 要】
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目的构建表达人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞感染效率.方法采用基因工程技术,将HIF-1α基因片段克隆至逆转录病毒载
【机 构】
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第三军医大学西南医院关节外科,第三军医大学新桥医院骨科,第三军医大学基础部解剖学教研室
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目的构建表达人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞感染效率.方法采用基因工程技术,将HIF-1α基因片段克隆至逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,鉴定后用脂质体法转染PT67细胞包装、扩增,最后用重组逆转录病毒感染NIH3T3细胞.其中采用PCR方法对重组病毒进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.结果酶切、测序及PCR结果与HIF-1α基因重组逆转录病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1.2×106 p
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