【摘 要】
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目的 探讨YB-1基因对自血病K562/A02细胞株基因表达谱及细胞生物学行为的影响.方法 采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)及随机片段HK的真核表达载体转染入K562/A02细胞中.采用基因芯片技术比较阳性转染组与对照组细胞的基因表达的差异,逆转录-PCR验证部分基因表达的改变.应用甲基氮唑蓝比色法和细胞周期测定分析对
【机 构】
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目的 探讨YB-1基因对自血病K562/A02细胞株基因表达谱及细胞生物学行为的影响.方法 采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)及随机片段HK的真核表达载体转染入K562/A02细胞中.采用基因芯片技术比较阳性转染组与对照组细胞的基因表达的差异,逆转录-PCR验证部分基因表达的改变.应用甲基氮唑蓝比色法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响,AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度.结果 阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞;芯片中共有表达差异的基因252条,其中143条表达下调,109条表达上调,包括转录调节、蛋白翻译合成、细胞增殖、细胞凋亡、细胞的免疫调节、细胞信号和传递蛋白表达等基因.逆转录-PCR证实CARD8基因表达上调,RHOC基因表达下调,和芯片检测结果一致.生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢,细胞周期动力学分析示阳性转染组G1期细胞增多,G2期与S期细胞显著减少;在小剂量三氧化二砷作用下,阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞.结论 YB-1基因下调可引起白血病K562/A02细胞株基因表达谱的改变,这些基因的改变可能对白血病细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学行为产生一定的影响。
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