【摘 要】
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目的观察骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对兔骨膜细胞(PDCs)向软骨细胞分化的影响。方法以兔胫骨骨膜为材料，采用组织块培养法分离PDCs，培养至第3代用于实验。实验分3组：对照组、软骨诱导液组、BMP-6联合诱导液组，分别加入普通培养基、软骨诱导液和BMP-6加软骨诱导液。倒置显微镜观察各组PDCs的形态变化，14 d后分别用Ⅱ型胶原(COL2A1)免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色检测PDCs的C
【机 构】
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目的观察骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对兔骨膜细胞(PDCs)向软骨细胞分化的影响。
方法以兔胫骨骨膜为材料，采用组织块培养法分离PDCs，培养至第3代用于实验。实验分3组：对照组、软骨诱导液组、BMP-6联合诱导液组，分别加入普通培养基、软骨诱导液和BMP-6加软骨诱导液。倒置显微镜观察各组PDCs的形态变化，14 d后分别用Ⅱ型胶原(COL2A1)免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色检测PDCs的COL2A1和蛋白聚糖(ACAN)的合成；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测COL2A1、ACAN和性别决定区Y框蛋白-9(Sox-9)的mRNA和蛋白表达水平。
结果(1)软骨诱导液组和BMP-6联合诱导液组PDCs逐渐变为类圆形软骨细胞形态，COL2A1免疫组织化学、甲苯胺蓝染色均为阳性，其中BMP-6联合诱导液组染色更深，对照组为阴性。(2)RT-PCR结果显示BMP-6联合诱导液组COL2A1、ACAN、Sox-9 mRNA表达量(0.813±0.042，1.621±0.156，0.927±0.218)明显高于软骨诱导液组(0.443±0.086，0.652±0.126，0.513±0.172)和对照组(0.181±0.042，0.272±0.062，0.214±0.062)(P＝0.000)。(3) Western blot检测各组细胞COL2A1、ACAN、Sox-9蛋白表达，其中BMP-6联合诱导液组(0.347±0.091，0.782±0.214，0.381±0.108)蛋白表达明显高于软骨诱导液组(0.205±0.065，0.513±0.128，0.223±0.054)和对照组(0.105±0.036，0.268±0.072，0.125±0.041)(P＝0.000)。
结论骨膜细胞在软骨诱导液诱导条件下可以向软骨细胞分化，BMP-6具有显著促进骨膜细胞向软骨细胞分化的作用。
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