携带绿色荧光蛋白基因的单轮感染活性HIV假病毒的建立及其活性检测

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pandanemo
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目的构建携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并研究该载体包装的HIV假病毒的感染活性,为进一步进行HIV生物学研究与中和抗体实验室评价搭建安全的技术平台。方法将增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因插入到骨架质粒pNL43LucR-E-的nef基因读码框,获得携带EGFP基因的质粒pNL43EGFPR-E-;通过将pNL43EGFPR-E-与编码HIV膜蛋白的质粒共转染293T细胞,收集上清,获得携带EGFP基因的HIV假病毒。该假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后可表达绿色荧光,这样通过流式细胞仪可测定表达绿色荧光的细胞数与细胞感染率。结果携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后,被感染的细胞可以表达绿色荧光蛋白,细胞的感染率与病毒加入量呈线性关系。结论获得了携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并建立了具有单轮感染活性的HIV假病毒感染的检测方法。
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