【摘 要】
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目的构建带组氨酸标签（His6·Tag）的瑞替普酶（Reteplase,r-PA）的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测。方法通过引物设计在r-PA基因5’端加上组氨酸标签（His6·Tag）。克隆到pET2
【机 构】
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苏州大学药学院,中国药科大学生物技术中心
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目的构建带组氨酸标签（His6·Tag）的瑞替普酶（Reteplase,r-PA）的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测。方法通过引物设计在r-PA基因5’端加上组氨酸标签（His6·Tag）。克隆到pET23a原核表达载体中,转化E．coli BL21 （DE3）,进行IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,用FAPA法测定其纤溶活性。结果构建的原核表达载体经PCR、酶切鉴定、测序后正确。表达产物分子质量39kDa,为r-PA特异性条带,纯化产物具有纤溶活性。结论成功地在大肠杆菌表达了带有标签的r-PA,简化了下游分离纯化和复性步骤。
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