【摘 要】
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目的 探究冬凌草甲素(Ori)对乳腺癌MCF-7细胞氟维司群(Ful)耐药的逆转作用及机制.方法 MCF-7细胞在含Ful(终浓度为1μmol·L-1)的DMEM培养液中培养12个月,压力筛选MCF-7耐药细胞,制备耐药细胞株MCF-7/Ful.MCF-7和MCF-7/Ful细胞分别加Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1,孵育48 h,计算MCF-7/Ful细胞耐药指数(RI).MCF-7/Ful细胞用Ori 5μmol·L-1+Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1联合孵育48 h,计算I
【机 构】
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衢州职业技术学院医学院,浙江 衢州 324000
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目的 探究冬凌草甲素(Ori)对乳腺癌MCF-7细胞氟维司群(Ful)耐药的逆转作用及机制.方法 MCF-7细胞在含Ful(终浓度为1μmol·L-1)的DMEM培养液中培养12个月,压力筛选MCF-7耐药细胞,制备耐药细胞株MCF-7/Ful.MCF-7和MCF-7/Ful细胞分别加Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1,孵育48 h,计算MCF-7/Ful细胞耐药指数(RI).MCF-7/Ful细胞用Ori 5μmol·L-1+Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1联合孵育48 h,计算IC50,根据Ful单独用药和与Ori联合用药的IC50值计算逆转倍数.MCF-7/Ful细胞分为细胞对照组、Ful 8μmol·L-1组、Ori 5μmol·L-1组和Ful+Ori组,作用24 h,彗星实验检测细胞拖尾长度;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;吖啶橙染色法检测细胞自噬;Western印迹法检测γ-H2AX、Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、周期蛋白D1表达、细胞分裂周期蛋白2(cdc2)磷酸化水平和微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ比值.结果 MCF-7/Ful细胞RI为8.67,Ori对MCF-7/Ful细胞耐药逆转倍数为4.2;彗星实验结果显示,Ful联合Ori能够使MCF-7/Ful细胞拖尾现象更加明显;流式细胞术结果显示,Ful联合Ori能有效地阻滞MCF-7/Ful细胞于G0/G1期(P<0.05),MCF-7/Ful细胞凋亡率显著增加(P<0.05);吖啶橙染色结果显示,Ful联合Ori能促使MCF-7/Ful细胞呈现橙红色,表现出明显的自噬现象;Western印迹结果显示,Ful联合Ori显著上调γ-H2AX蛋白表达(P<0.01);显著降低Bcl-2表达(P<0.01),升高Bax、胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9蛋白表达(P<0.01);显著降低周期蛋白D1表达(P<0.05),cdc2磷酸化升高水平(P<0.01);LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著增加(P<0.05).结论 Ori能够逆转乳腺癌MCF-7/Ful细胞获得性耐药,其机制可能是通过诱导MCF-7/Ful细胞产生DNA损伤,进而引起细胞凋亡、细胞周期阻滞及细胞自噬.
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