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摘要：目的：通过虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠ConA诱导的淋巴细胞增殖能力影响、对小鼠血清溶血素含量和促进抗体生成细胞的生成作用影响、以及对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数影响等试验观察，表明虫草、灵芝、香菇菌丝多糖三个剂量组能明显增强ConA诱导的淋巴细胞增殖能力，能显著升高小鼠血清溶血素含量和促进抗体生成细胞的生成，能明显增强小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数。结论：虫草、灵芝、香菇菌丝多糖具有增强机体免疫功能的作用。
关键词：冬虫夏草，灵芝，香菇，菌丝多糖，增强机体免疫功能作用
Abstract：Objective： Effect on the lymphocyte proliferation induced in mice ConA by polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium Lentinus edodes mycelium，effect on the content of serum hemolysin in mice and promoting effects of antibody producing cell， and influence of phagocytic index of macrophage phagocytosis of chicken red blood cell in mice macrophages， etc. show that three dose groups of polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium and ：Lentinus edodes mycelium could significantly enhance the proliferation ability of lymphocytes induced by ConA， could significantly increase the content of serum hemolysin in mice and promote the generation of antibody producing cells， and could obviously enhance the phagocytic index of macrophage phagocytosis of chicken red blood cells of mice. Conclusion： polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium： and Lentinus edodes mycelium can enhance immune function.
Keywords： Cordyceps sinensis， Ganoderma lucidum， Lentinus edodes， polysaccharose of mycelium， Enhance the immunity function
本实验我们分三个步骤：第一，从采集的新鲜冬虫夏草子实体上分离得到的一种冬虫夏草菌—蝙蝠蛾被毛孢，经过液体发酵培养得到虫草菌丝体，对其菌丝体进行提取得到虫草菌丝多糖；第二，对灵芝、香菇分别进行发酵菌丝培养得到灵芝、香菇菌丝发酵液，过滤得到菌丝，对其菌丝进行提取得到灵芝、香菇菌丝多糖；第三，对虫草、灵芝、香菇菌丝多糖增强免疫功能作用进行研究实验。
1. 材料和方法
1.1 样品：
虫草菌丝多糖，由冬虫夏草菌—蝙蝠蛾被毛孢，经过液体发酵培养得到菌丝体，对其菌丝体进行提取得到虫草菌丝多糖；灵芝、香菇菌丝多糖，分别对灵芝、香菇进行发酵菌丝培养得到灵芝、香菇菌丝发酵液，过滤得到菌丝，对其菌丝进行提取得到灵芝、香菇菌丝多糖；对虫草、灵芝、香菇菌丝多糖提取浓缩成棕红色液体，成人推荐每天摄入2次，每次10ml。按成人60kg体重计，即0.33ml/kg.bw。
1.2试验动物：
清洁级BALB/c 小鼠，雄性，250只，18～22g，购自湖北省实验动物研究中心，合格证号为医动字第19-006号。
1.3 剂量选择：
试验设三个剂量组：10倍人体摄入量（3.33ml/Kg.bw）组、20倍人体摄入量（6.67ml/Kg.bw）组、30倍人体摄入量（10.0ml/Kg.bw）组，以及阴性对照组（蒸馏水灌胃）和溶剂（11%醋）对照组。小鼠灌胃体积为0.2ml/10g.bw。
1.4主要仪器与试剂：
1. 5实验方法：
1.5.1 迟发型变态反应（DTH）：
1.5.2 半数溶血值（HC50）的测定和抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）：
1.5.2.1半数溶血值（HC50）的测定：
1.5.2.2抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）：
1.5.3 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）：
1.6 实验数据统计：实验所得数据采用SAS软件进行分析.
2.结果
2.1虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠细胞免疫功能（小鼠脾淋巴细胞转化实验以及小鼠迟发型变态反应（DTH））的影响 ，见表1。
表1 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05， **表明与阴性对照组比较， p<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01. 淋巴细胞增殖实验的OD差值经方差分析，F=6.14，P<0.01，Q检验，10倍、30倍剂量组与两对照组比较，有显著性差异，20倍剂量组与两对照组比较，有极显著性差异。耳肿程度经方差分析，F=4.51，P<0.01，Q检验，与阴性对照组相比，10倍、30倍剂量组有极显著性差异，20倍剂量组有显著性差异；三剂量组与溶剂对照组之间无显著性差异。
2.2虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠体液免疫功能（抗体生成细胞测定以及小鼠半数溶血值测定）的影响，见表2。
表2 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠体液免疫功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05， **表明与阴性对照组比较， p<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01.
溶血空斑数经方差分析，F=21.42， p<0.01，10倍剂量组与两对照组相比，有显著性差异，20、30倍剂量组两对照组比较，有极显著性差异。HC50经方差分析，F=34.88， p<0.01。Q检验，三剂量组与两对照组比较，有极显著性差异，P<0.01。
2.3 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠单核-巨噬细胞功能（小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力）的影响，见表3。
表3 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠小鼠单核-巨噬细胞功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05；**与阴性对照组比较， P<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01.
小鼠碳廓清实验吞噬指数经方差分析，F=2.11，P>0.05。各剂量组与两对照组相比较，无显著性差异。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率经方差分析，F=3.96，P<0.05，10倍剂量组与两对照组相比较，有显著性差异。吞噬指数经方差分析，F=6.31， P<0.01，10倍、30倍剂量组与两对照组比较，有极显著性差异，20倍剂量组与两对照组比较，有显著性差异。
3. 结论
1） 小鼠细胞免疫功能实验表明，在脾淋巴细胞转化实验中， 10倍、30倍剂量组OD差值明显高于两对照组，有显著性差异，20倍剂量组OD差值极显著高于两对照组。迟发型变态反应实验表明，耳肿程度与阴性对照组相比，10倍、30倍剂量组有极显著性差异，20倍剂量组有显著性差异；三剂量组与溶剂对照组之间无显著性差异，呈阳性结果。
2）小鼠体液免疫功能实验表明，在抗体生成细胞实验中，虫草、灵芝、香菇菌丝多糖10倍剂量组脾细胞溶血空斑数显著高于两对照组，20、30倍剂量组脾细胞溶血空斑数极显著高于两对照组；小鼠半数溶血值测定表明，三个剂量组的HC50值与两对照组相比有极显著差异，呈阳性结果。
3）小鼠单核-巨噬细胞功能实验结果表明，在小鼠碳廓清实验中，虫草、灵芝菌丝多糖各剂量组的吞噬指数与两对照组相比，无显著性差异；小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验表明，10倍剂量组的吞噬率与两对照组相比，有显著性差异；20倍剂量组的吞噬指数显著高于两对照组，10倍、30倍剂量组的吞噬指数极显著高于两对照组，呈阳性结果。
由以上结果判定虫草、灵芝、香菇菌丝多糖具有增强免疫力功能。
参考文献：
1. 胡奇 王玉翠等，冬虫夏草增强免疫功能实验研究，《内蒙古中医药》，2008年，第24期
2. 魏 涛 唐粉芳等，冬虫夏草菌丝体改善肺免疫功能的研究，《食品科学》，2002年，第23卷，第8期
3. 谭志勇 何焕清等，虫草灵芝孢子粉的食用安全性和免疫功能研究，《中国食用菌》，2009年，04期
4. 张录璐，低分子量香菇多糖免疫增强作用的研究，《东北师范大学》，2008年
5. 谢小莉 杨立杰等，冬虫夏草药理作用和临床研究进展，《黑龙江中医药》，2007年，第2期
6. 叶天任，一种冬虫夏草菌提取浓缩液的制备方法及其应用，发明专利，专利号：200710142960.1
关键词：冬虫夏草，灵芝，香菇，菌丝多糖，增强机体免疫功能作用
Abstract：Objective： Effect on the lymphocyte proliferation induced in mice ConA by polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium Lentinus edodes mycelium，effect on the content of serum hemolysin in mice and promoting effects of antibody producing cell， and influence of phagocytic index of macrophage phagocytosis of chicken red blood cell in mice macrophages， etc. show that three dose groups of polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium and ：Lentinus edodes mycelium could significantly enhance the proliferation ability of lymphocytes induced by ConA， could significantly increase the content of serum hemolysin in mice and promote the generation of antibody producing cells， and could obviously enhance the phagocytic index of macrophage phagocytosis of chicken red blood cells of mice. Conclusion： polysaccharose of Cordyceps mycelium and Ganoderma lucidum mycelium： and Lentinus edodes mycelium can enhance immune function.
Keywords： Cordyceps sinensis， Ganoderma lucidum， Lentinus edodes， polysaccharose of mycelium， Enhance the immunity function
本实验我们分三个步骤：第一，从采集的新鲜冬虫夏草子实体上分离得到的一种冬虫夏草菌—蝙蝠蛾被毛孢，经过液体发酵培养得到虫草菌丝体，对其菌丝体进行提取得到虫草菌丝多糖；第二，对灵芝、香菇分别进行发酵菌丝培养得到灵芝、香菇菌丝发酵液，过滤得到菌丝，对其菌丝进行提取得到灵芝、香菇菌丝多糖；第三，对虫草、灵芝、香菇菌丝多糖增强免疫功能作用进行研究实验。
1. 材料和方法
1.1 样品：
虫草菌丝多糖，由冬虫夏草菌—蝙蝠蛾被毛孢，经过液体发酵培养得到菌丝体，对其菌丝体进行提取得到虫草菌丝多糖；灵芝、香菇菌丝多糖，分别对灵芝、香菇进行发酵菌丝培养得到灵芝、香菇菌丝发酵液，过滤得到菌丝，对其菌丝进行提取得到灵芝、香菇菌丝多糖；对虫草、灵芝、香菇菌丝多糖提取浓缩成棕红色液体，成人推荐每天摄入2次，每次10ml。按成人60kg体重计，即0.33ml/kg.bw。
1.2试验动物：
清洁级BALB/c 小鼠，雄性，250只，18～22g，购自湖北省实验动物研究中心，合格证号为医动字第19-006号。
1.3 剂量选择：
试验设三个剂量组：10倍人体摄入量（3.33ml/Kg.bw）组、20倍人体摄入量（6.67ml/Kg.bw）组、30倍人体摄入量（10.0ml/Kg.bw）组，以及阴性对照组（蒸馏水灌胃）和溶剂（11%醋）对照组。小鼠灌胃体积为0.2ml/10g.bw。
1.4主要仪器与试剂：
1. 5实验方法：
1.5.1 迟发型变态反应（DTH）：
1.5.2 半数溶血值（HC50）的测定和抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）：
1.5.2.1半数溶血值（HC50）的测定：
1.5.2.2抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）：
1.5.3 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）：
1.6 实验数据统计：实验所得数据采用SAS软件进行分析.
2.结果
2.1虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠细胞免疫功能（小鼠脾淋巴细胞转化实验以及小鼠迟发型变态反应（DTH））的影响 ，见表1。
表1 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05， **表明与阴性对照组比较， p<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01. 淋巴细胞增殖实验的OD差值经方差分析，F=6.14，P<0.01，Q检验，10倍、30倍剂量组与两对照组比较，有显著性差异，20倍剂量组与两对照组比较，有极显著性差异。耳肿程度经方差分析，F=4.51，P<0.01，Q检验，与阴性对照组相比，10倍、30倍剂量组有极显著性差异，20倍剂量组有显著性差异；三剂量组与溶剂对照组之间无显著性差异。
2.2虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠体液免疫功能（抗体生成细胞测定以及小鼠半数溶血值测定）的影响，见表2。
表2 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠体液免疫功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05， **表明与阴性对照组比较， p<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01.
溶血空斑数经方差分析，F=21.42， p<0.01，10倍剂量组与两对照组相比，有显著性差异，20、30倍剂量组两对照组比较，有极显著性差异。HC50经方差分析，F=34.88， p<0.01。Q检验，三剂量组与两对照组比较，有极显著性差异，P<0.01。
2.3 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠单核-巨噬细胞功能（小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力）的影响，见表3。
表3 虫草、灵芝、香菇菌丝多糖对小鼠小鼠单核-巨噬细胞功能的影响 （X±S）
注： *表明与阴性对照组比较， p<0.05；**与阴性对照组比较， P<0.01.
△表明与溶剂对照组比较， p<0.05， △△表明与溶剂对照组比较， p<0.01.
小鼠碳廓清实验吞噬指数经方差分析，F=2.11，P>0.05。各剂量组与两对照组相比较，无显著性差异。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率经方差分析，F=3.96，P<0.05，10倍剂量组与两对照组相比较，有显著性差异。吞噬指数经方差分析，F=6.31， P<0.01，10倍、30倍剂量组与两对照组比较，有极显著性差异，20倍剂量组与两对照组比较，有显著性差异。
3. 结论
1） 小鼠细胞免疫功能实验表明，在脾淋巴细胞转化实验中， 10倍、30倍剂量组OD差值明显高于两对照组，有显著性差异，20倍剂量组OD差值极显著高于两对照组。迟发型变态反应实验表明，耳肿程度与阴性对照组相比，10倍、30倍剂量组有极显著性差异，20倍剂量组有显著性差异；三剂量组与溶剂对照组之间无显著性差异，呈阳性结果。
2）小鼠体液免疫功能实验表明，在抗体生成细胞实验中，虫草、灵芝、香菇菌丝多糖10倍剂量组脾细胞溶血空斑数显著高于两对照组，20、30倍剂量组脾细胞溶血空斑数极显著高于两对照组；小鼠半数溶血值测定表明，三个剂量组的HC50值与两对照组相比有极显著差异，呈阳性结果。
3）小鼠单核-巨噬细胞功能实验结果表明，在小鼠碳廓清实验中，虫草、灵芝菌丝多糖各剂量组的吞噬指数与两对照组相比，无显著性差异；小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验表明，10倍剂量组的吞噬率与两对照组相比，有显著性差异；20倍剂量组的吞噬指数显著高于两对照组，10倍、30倍剂量组的吞噬指数极显著高于两对照组，呈阳性结果。
由以上结果判定虫草、灵芝、香菇菌丝多糖具有增强免疫力功能。
参考文献：
1. 胡奇 王玉翠等，冬虫夏草增强免疫功能实验研究，《内蒙古中医药》，2008年，第24期
2. 魏 涛 唐粉芳等，冬虫夏草菌丝体改善肺免疫功能的研究，《食品科学》，2002年，第23卷，第8期
3. 谭志勇 何焕清等，虫草灵芝孢子粉的食用安全性和免疫功能研究，《中国食用菌》，2009年，04期
4. 张录璐，低分子量香菇多糖免疫增强作用的研究，《东北师范大学》，2008年
5. 谢小莉 杨立杰等，冬虫夏草药理作用和临床研究进展，《黑龙江中医药》，2007年，第2期
6. 叶天任，一种冬虫夏草菌提取浓缩液的制备方法及其应用，发明专利，专利号：200710142960.1