【摘 要】
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糖苷水解酶85家族的内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶具有糖基转移酶活性,利用该类酶,可以合成特定结构N-糖链修饰的糖基化复合物。为构建糖基转移酶筛选系统,将N-乙酰氨基葡萄糖
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31400693),江苏省自然科学基金项目(BK20140141),中央高校基本科研业务费项目(JUSRP51508)
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糖苷水解酶85家族的内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶具有糖基转移酶活性,利用该类酶,可以合成特定结构N-糖链修饰的糖基化复合物。为构建糖基转移酶筛选系统,将N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的跨膜定位区域与绿色荧光蛋白融合表达,成功把带有天冬酰胺连接糖基化位点的单体增强绿色荧光蛋白定位到中国仓鼠卵巢细胞的高尔基体中。流式细胞仪分析显示,融合了定位区域后,绿色荧光蛋白仍可以发出荧光,且在引入糖基化位点后,细胞荧光强度约降低10倍。经衣霉素处理,细胞糖基化被抑制,同时荧光强度减弱。此细胞株荧光强度对于糖基化水平的依赖性表
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