【摘 要】
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为了制备猪IL-10的单克隆抗体（MAb）,本研究根据GenBank登录的猪白细胞介素10（PIL-10）基因序列设计两对特异性引物,利用套式PCR扩增PIL-10成熟蛋白编码基因（490bp）,构建原核表达载体
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（30871868）, 国家科技支撑计划（2007BAD86B02-3、2006BAD06A04）, 江苏省科技攻关项目（BE2007342）, 教育部博士点基金项目（20060307007）
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为了制备猪IL-10的单克隆抗体（MAb）,本研究根据GenBank登录的猪白细胞介素10（PIL-10）基因序列设计两对特异性引物,利用套式PCR扩增PIL-10成熟蛋白编码基因（490bp）,构建原核表达载体pET28a-PIL-10,并转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE和western blot分析鉴定,证明PIL-10重组蛋白获得表达。提取纯化该重组蛋白包涵体,免疫BALB/c小鼠,经过3次细胞融合,间接ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌抗猪IL-10MAb的杂交瘤细胞,
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