【摘 要】
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目的建立一种高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计方法。方法共设计了15对高GC含量(66.0%~84.0%)DNA序列PCR扩增引物,引物Tm值均≥79.7℃,引物Tm差值(△Tm)均≤1℃。对本研究所
【机 构】
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解放军458医院检验科; 解放军458医院传染科; 南方医科大学南方医院检验科; 解放军458医院血库;
【基金项目】
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全军医学科学技术研究“十一五”计划保健专项课题(08BJZ07)
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目的建立一种高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计方法。方法共设计了15对高GC含量(66.0%~84.0%)DNA序列PCR扩增引物,引物Tm值均≥79.7℃,引物Tm差值(△Tm)均≤1℃。对本研究所设计引物及相关参考文献中部分引物的参数进行统计学分析。另外,基于本研究方法,设计了26对引物,以验证该方法在非高GC含量(35.2%~53.5%)DNA序列PCR扩增中的实用性。结果采用本研究方法,所有15对高GC含量DNA序列均成功扩增;统计结果显示,Tm值和△Tm是影响高GC含量DNA序列扩增的主要因素。结论设计具有较高Tm值和较低△Tm的引物可有效的解决高GC含量DNA序列的PCR扩增问题。另外,在较高的退火温度下,引物或DNA序列的二级结构无法形成。
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