【摘 要】
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为了获得牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）L1R蛋白及其多克隆抗体，试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列，将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-L1R重组阳性质粒，转化至BL21（DE3）大肠杆菌感受态，用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。对诱导表达的重组蛋白采用镍离子亲和层析柱进行纯化，
【基金项目】
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内蒙古农业大学高层次人才引进项目（NDY2018-2;NDGCC2016-22）；
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为了获得牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）L1R蛋白及其多克隆抗体，试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列，将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-L1R重组阳性质粒，转化至BL21（DE3）大肠杆菌感受态，用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。对诱导表达的重组蛋白采用镍离子亲和层析柱进行纯化，通过透析进行纯化蛋白的复性，用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定。将鉴定成功的蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价。结果表明：L1R蛋白在大肠杆菌中高效表达，在1 mmol/L IPTG、37℃、200 r/min条件下，主要以包涵体的形式表达且纯度较高，表达的蛋白质分子质量约为40 ku,与预期的蛋白质大小一致。纯化后的L1R重组蛋白能被His单克隆抗体及山羊痘阳性血清识别，反应原性良好。制备的小鼠抗LSDV L1R多克隆抗体效价可达1∶102 400,免疫原性良好。说明试验成功在大肠杆菌中表达LSDV L1R重组蛋白，并制备获得多克隆抗体。
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