【摘 要】
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目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对甲状腺癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移的影响及机制.方法 免疫组织化学(IHC)检测45份甲状腺癌标本中KLF4的表达情况.常规体外人甲状腺乳头状癌细胞株KTC1培养,将其分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染LipofectammeTM2000)、KLF4过表达组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4)、siRNA-NC组(转染LipofectamineTM 2000+ NC-siRNA)和KLF4-siRNA组(转染L
【机 构】
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上海市宝山区中西医结合医院甲状腺外科 201999
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目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对甲状腺癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移的影响及机制.方法 免疫组织化学(IHC)检测45份甲状腺癌标本中KLF4的表达情况.常规体外人甲状腺乳头状癌细胞株KTC1培养,将其分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染LipofectammeTM2000)、KLF4过表达组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4)、siRNA-NC组(转染LipofectamineTM 2000+ NC-siRNA)和KLF4-siRNA组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4-siRNA).免疫荧光检测细胞中KLF4与β-catenin的分布和共表达;Transwell检测癌细胞侵袭和迁移的能力,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测EMT和Wnt信号通路相关的基因和蛋白质表达水平.蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)检测KLF4和β-catenin间的互作情况.结果 免疫荧光标记显示,KLF4和β-catenin在KTC1细胞质中共定位.qRT-PCR结果显示,KLF4过表达组上皮型钙黏蛋白(E-cad)mRNA表达明显高于其他组(P＜0.05),神经型钙黏蛋白(N-cad)和基质金属蛋白酶7(MMP7) mRNA表达水平明显低于其他组(P＜0.05);沉默干扰KLF4后,与其他组相比,KLF4-siRNA组中的E-cad mRNA明显降低(P＜0.05),N-cad和MMP7 mRNA明显升高(P＜0.05).Western blot结果显示,KLF4过表达组中E-cad表达较其他组明显升高(P＜0.05),而N-cad、MMP7表达则明显低于其他组(P＜0.05);当沉默干扰KLF4时,上皮标志物减少(P＜0.05),间质标志物增加(P＜0.05).Transwell结果显示,过表达KLF4可以抑制KTC1细胞的迁移和侵袭,干扰沉默KLF4可增强KTC1细胞的迁移和侵袭.Co-IP结果显示,KLF4与β-catenin之间存在相互作用.KLF4在甲状腺癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为24.44％ (11/45)和71.11％ (32/45),二者比较差异有统计学意义(x2=19.639,P＜0.001).45份甲状腺癌标本中,伴淋巴结转移18份标本中KLF4表达4份阳性,而不伴淋巴结转移27份标本中,KLF4表达15份阳性,二者比较差异有统计学意义(22.22％ vs.55.56％,x2=4.919,P=0.027).结论 KLF4通过Wnt信号通路调节相关下游靶基因的表达,从而影响了甲状腺癌的侵袭和迁移能力.
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