【摘 要】
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目的 探讨干预微RNA-181a(miR-181a)促进多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的机制.方法 检测健康志愿者外周血、MM患者骨髓、MM细胞株MM1S中miR-181a的表达水平.分别转染miR-181a抑制剂、对照siRNA入MM1S细胞,回复实验进一步验证miR-181a功能.流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体超微结构及自噬泡,Western blotting检测cleaved-caspase-3、Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、Parkin蛋白的表达.结果
【机 构】
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山东中医药大学附属医院血液科,济南 250011;山东省疾病预防控制中心,济南 250011
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目的 探讨干预微RNA-181a(miR-181a)促进多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的机制.方法 检测健康志愿者外周血、MM患者骨髓、MM细胞株MM1S中miR-181a的表达水平.分别转染miR-181a抑制剂、对照siRNA入MM1S细胞,回复实验进一步验证miR-181a功能.流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体超微结构及自噬泡,Western blotting检测cleaved-caspase-3、Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、Parkin蛋白的表达.结果 MM患者骨髓和MM1S细胞株中,miR-181a相对表达水平显著升高(1.57±0.09和1.64±0.06,P<0.05).miRNA-181a抑制剂作用下,MM1S细胞的凋亡率及cleaved-caspase-3表达水平显著高于对照组及阴性对照组,电镜下自噬泡数目增加,线粒体结构毁坏严重,线粒体膜电位水平低下,Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著升高,而P62表达水平显著降低.敲减Parkin的回复实验显示,miRNA-181a抑制剂对MM细胞的作用明显降低.结论 抑制miRNA-181a可增强Parkin表达,促进Parkin通路介导的线粒体自噬,从而促进MM细胞凋亡.
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