小檗碱对牙髓干细胞MAPK/ERK信号通路及成牙本质向分化的影响研究

来源 :中国实用口腔科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aiwoba9982
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目的 探讨小檗碱对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响.方法 采用酶消化法提取DPSCs,将培养鉴定的DPSCs传代培养至第3~5代,用于以下实验.实验分为对照组(正常培养DPSCs)、矿化液组(加入矿化液)、小檗碱组(加入10 μmol/L小檗碱)、矿化液+MAPK抑制剂组(加入矿化液+10 μmol/L MAPK抑制剂SB203580)、小檗碱+MAPK抑制剂组(10 μmol/L小檗碱+10 μmol/L MAPK抑制剂SB203580).CCK-8法检测各组培养1、7、10、14 d时的细胞增殖情况.各组处理14d,茜素红染色观察细胞矿化情况;实时荧光定量PCR检测细胞碱性磷酸梅(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、ERK、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平.结果 5组细胞处理1、7、10、14d,对照组、矿化液组、小檗碱组光密度(OD)值差异无统计学意义(P> 0.05),说明3组的细胞增殖能力相似;分别与对照组、矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组和小檗碱+MAPK抑制剂组的OD值升高(均P < 0.05),说明其细胞增殖能力增强.与对照组相比,矿化液组和小檗碱组的DPSCs矿化结节形成能力增强,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值升高(P< 0.05).分别与矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组、小檗碱+MAPK抑制剂组的DPSCs矿化结节形成能力减弱,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值降低(P <0.05).结论 小檗碱可促进DPSCs成牙本质向分化,可能是通过激活p38MAPK/ERK信号通路实现的.
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