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摘要：目的 建立同仁牛黄清心丸中麝香酮的气相色谱（GC）含量测定方法。方法 色谱柱为HP-5柱（30 mm×32 mm， 25 ?m），载气为氮气，流速1.0 mL/min，柱温190 ℃，进样口温度250 ℃，氢火焰离子化检测器温度220 ℃。结果 麝香酮进样量在0.12～0.28 ?g（r=0.999 1）范围内，麝香酮峰面积与进样量呈现良好的线性关系，平均加样回收率为98.72%，RSD=2.34%。结论 该方法快速、简便、准确、重复性较好，结果可靠，可用于控制同仁牛黄清心丸制剂的质量。
关键词：同仁牛黄清心丸；麝香酮；气相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）09-0064-02
同仁牛黄清心丸是由麝香、牛黄、当归、甘草、山药、黄芩等27味药组成的中药制剂，具有清心化痰、镇静祛风功效，用于风痰阻窍所致的头晕目眩、痰涎壅盛、神智混乱、语言不清及惊风抽搐、癫痫等。其收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第17册（WS3-B-3186-98）[1]，为同仁堂集团独家产品，但尚未建立含量测定标准。为了更有效、快捷地控制制剂的质量，保证其疗效，参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[2]，采用气相色谱法（GC）对处方贵重药材麝香中主要有效成分麝香酮进行含量测定研究。现报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 6890气相色谱仪（美国安捷伦公司），氢火焰离子检测器（FID，美国安捷伦公司），Mettler Toledo AG135十万分之一电子分析天平（瑞士METTER公司）。
麝香酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号110719- 200410），无水乙醇为色谱纯及分析纯，同仁牛黄清心丸（北京同仁堂集团股份有限公司，批号20041023）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性
色谱柱为Agilent HP-5柱（30 mm×32 mm，25 ?m），柱温190 ℃，进样口温度250 ℃，FID检测器温度220 ℃。理论塔板数按麝香酮峰计算应不低于1 500。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 mL含0.07 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10丸，精密称定，研细，取约2.5 g，精密称定，精密加入无水乙醇10 mL，密塞，振摇，静置1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除麝香的其他药味，依照同仁牛黄清心丸的生产工艺制成缺麝香的同仁牛黄清心丸阴性制剂，再按供试品溶液的制备方法制成缺麝香的阴性对照溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密称取麝香酮对照品16.67 mg，置10 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述对照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL置25 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密吸取此溶液3 ?L，注入气相色谱仪。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标做回归计算。回归方程为：Y=786.775 48X-5.983 21（r=0.999 1）。结果表明，样品进样量在0.12～0.28 ?g范围内，麝香酮峰面积与进样量呈现良好的线性关系。
2.4 空白试验
分别吸取麝香酮对照品溶液、同仁牛黄清心丸供试品溶液及缺麝香的阴性对照溶液3 ?L，注入色谱仪，按前法分别测定，得到相应的色谱图（见图1）。结果表明：同仁牛黄清心丸供试品溶液的色谱图在与麝香酮对照品相应保留时间处出现麝香酮的色谱峰；而缺麝香的阴性对照溶液色谱图在相同保留时间处没有出现上述色谱峰，说明制剂中其他成分对麝香酮的测定不产生干扰。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液3 ?L，注入气相色谱仪，重复进样5次，结果麝香酮峰面积的RSD=1.60%。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号20041023）3 ?L，注入气相色谱仪，按0、2、4、6、8 h时间间隔，分别测定峰面积，麝香酮峰面积的RSD=1.19%，表明供试品溶液制备后8 h内性质稳定。
2.7 重复性试验
分别精密称取6份样品（批号20041023），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，注入气相色谱仪，麝香酮峰面积的RSD=1.52%，表明该方法测定供试品中麝香酮的含量，重复性较好。
2.8 加样回收率试验
取本品已知准确含量的样品（批号20041023）1.25 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中。精密加入麝香酮对照品溶液（0.333 4 mg），按“2.2.2”项下方法制备并测定，结果见表1。结果表明，该方法测定样品中麝香酮的含量，加样回收率均符合要求。
2.9 样品含量测定
精密称取3批不同批号同仁牛黄清心丸制剂，每批平行测定3份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并在上述色谱条件下测定，计算样品中麝香酮的含量，结果见表2。
3 讨论
由于麝香酮具有挥发性，常温下不稳定，在生产过程中易损失，因此，含量测定选择麝香酮为指标。根据其易挥发的理化性质，故选用GC对其进行检测[2]。选择麝香酮最佳分离条件是含量测定的重要因素之一，供试品中被测成分分离效果的好坏，取决于色谱柱的选择与柱温的确定，在多次分离比较试验之后，最终选择色谱条件：色谱柱为HP-5柱（30 mm×32 mm，25 ?m），柱温为190 ℃，进样口温度250 ℃，FID检测器温度220 ℃。在提取溶剂的选择上，本试验对文献[3-5]提取麝香酮的溶剂石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇进行比较，发现无水乙醇的提取效率最高，故选用无水乙醇。
用GC测定同仁牛黄清心丸中的麝香酮含量，测定结果表明该方法稳定，重复性好，且回收率在95%以上，可作为同仁牛黄清心丸中麝香酮的含量测定方法。
参考文献：
[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂（第17册）[S].1998：81.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：361-362.
[3] 张皓冰，何昱，贾国惠，等.气相色谱/质谱（GC/MS）联用技术对麝香的多成分含量分析[J].中成药，2002，24（11）：868.
[4] 周锐，王辉.气相色谱法测定麝香祛痛搽剂中麝香酮的研究[J].时珍国医国药，2010，21（7）：1813-1814.
[5] 吕霞，郭青，钟文英.气相色谱法测定六神丸中麝香酮含量[J].中国药业，2010，19（21）：24-25.
[6] 唐洪梅，黄樱华，李得堂，等.气相色谱法测定人工麝香中麝香酮的含量[J].中国实验方剂学杂志，2007，13（9）：4-5.
（收稿日期：2012-02-27，编辑：陈静）
关键词：同仁牛黄清心丸；麝香酮；气相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）09-0064-02
同仁牛黄清心丸是由麝香、牛黄、当归、甘草、山药、黄芩等27味药组成的中药制剂，具有清心化痰、镇静祛风功效，用于风痰阻窍所致的头晕目眩、痰涎壅盛、神智混乱、语言不清及惊风抽搐、癫痫等。其收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第17册（WS3-B-3186-98）[1]，为同仁堂集团独家产品，但尚未建立含量测定标准。为了更有效、快捷地控制制剂的质量，保证其疗效，参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[2]，采用气相色谱法（GC）对处方贵重药材麝香中主要有效成分麝香酮进行含量测定研究。现报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 6890气相色谱仪（美国安捷伦公司），氢火焰离子检测器（FID，美国安捷伦公司），Mettler Toledo AG135十万分之一电子分析天平（瑞士METTER公司）。
麝香酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号110719- 200410），无水乙醇为色谱纯及分析纯，同仁牛黄清心丸（北京同仁堂集团股份有限公司，批号20041023）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性
色谱柱为Agilent HP-5柱（30 mm×32 mm，25 ?m），柱温190 ℃，进样口温度250 ℃，FID检测器温度220 ℃。理论塔板数按麝香酮峰计算应不低于1 500。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 mL含0.07 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10丸，精密称定，研细，取约2.5 g，精密称定，精密加入无水乙醇10 mL，密塞，振摇，静置1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除麝香的其他药味，依照同仁牛黄清心丸的生产工艺制成缺麝香的同仁牛黄清心丸阴性制剂，再按供试品溶液的制备方法制成缺麝香的阴性对照溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密称取麝香酮对照品16.67 mg，置10 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述对照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL置25 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密吸取此溶液3 ?L，注入气相色谱仪。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标做回归计算。回归方程为：Y=786.775 48X-5.983 21（r=0.999 1）。结果表明，样品进样量在0.12～0.28 ?g范围内，麝香酮峰面积与进样量呈现良好的线性关系。
2.4 空白试验
分别吸取麝香酮对照品溶液、同仁牛黄清心丸供试品溶液及缺麝香的阴性对照溶液3 ?L，注入色谱仪，按前法分别测定，得到相应的色谱图（见图1）。结果表明：同仁牛黄清心丸供试品溶液的色谱图在与麝香酮对照品相应保留时间处出现麝香酮的色谱峰；而缺麝香的阴性对照溶液色谱图在相同保留时间处没有出现上述色谱峰，说明制剂中其他成分对麝香酮的测定不产生干扰。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液3 ?L，注入气相色谱仪，重复进样5次，结果麝香酮峰面积的RSD=1.60%。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号20041023）3 ?L，注入气相色谱仪，按0、2、4、6、8 h时间间隔，分别测定峰面积，麝香酮峰面积的RSD=1.19%，表明供试品溶液制备后8 h内性质稳定。
2.7 重复性试验
分别精密称取6份样品（批号20041023），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，注入气相色谱仪，麝香酮峰面积的RSD=1.52%，表明该方法测定供试品中麝香酮的含量，重复性较好。
2.8 加样回收率试验
取本品已知准确含量的样品（批号20041023）1.25 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中。精密加入麝香酮对照品溶液（0.333 4 mg），按“2.2.2”项下方法制备并测定，结果见表1。结果表明，该方法测定样品中麝香酮的含量，加样回收率均符合要求。
2.9 样品含量测定
精密称取3批不同批号同仁牛黄清心丸制剂，每批平行测定3份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并在上述色谱条件下测定，计算样品中麝香酮的含量，结果见表2。
3 讨论
由于麝香酮具有挥发性，常温下不稳定，在生产过程中易损失，因此，含量测定选择麝香酮为指标。根据其易挥发的理化性质，故选用GC对其进行检测[2]。选择麝香酮最佳分离条件是含量测定的重要因素之一，供试品中被测成分分离效果的好坏，取决于色谱柱的选择与柱温的确定，在多次分离比较试验之后，最终选择色谱条件：色谱柱为HP-5柱（30 mm×32 mm，25 ?m），柱温为190 ℃，进样口温度250 ℃，FID检测器温度220 ℃。在提取溶剂的选择上，本试验对文献[3-5]提取麝香酮的溶剂石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇进行比较，发现无水乙醇的提取效率最高，故选用无水乙醇。
用GC测定同仁牛黄清心丸中的麝香酮含量，测定结果表明该方法稳定，重复性好，且回收率在95%以上，可作为同仁牛黄清心丸中麝香酮的含量测定方法。
参考文献：
[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂（第17册）[S].1998：81.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：361-362.
[3] 张皓冰，何昱，贾国惠，等.气相色谱/质谱（GC/MS）联用技术对麝香的多成分含量分析[J].中成药，2002，24（11）：868.
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[5] 吕霞，郭青，钟文英.气相色谱法测定六神丸中麝香酮含量[J].中国药业，2010，19（21）：24-25.
[6] 唐洪梅，黄樱华，李得堂，等.气相色谱法测定人工麝香中麝香酮的含量[J].中国实验方剂学杂志，2007，13（9）：4-5.
（收稿日期：2012-02-27，编辑：陈静）