【摘 要】
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为了鉴定猪水泡病病毒(SVDV)HK/70株的全长cDNA分子的感染性,以所构建的SVDVHK/70株的全长cDNA分子为模板,应用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,将获得的RNA用脂质体转染法导
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部畜禽病毒学重点开放实验室; 病毒病PⅢ实验室; 中国农业科学院研究生院; 北京10008
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为了鉴定猪水泡病病毒(SVDV)HK/70株的全长cDNA分子的感染性,以所构建的SVDVHK/70株的全长cDNA分子为模板,应用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,将获得的RNA用脂质体转染法导入IBRS-2细胞,传代培养,观察到典型的SVDV致细胞病变效应.反向血凝鉴定、间接免疫荧光、RT-PCR及序列测定结果表明,从猪水泡病病毒全长cDNA拯救出了猪水泡病病毒(pSVDV).用电子显微镜观察了pSVDV的形态,测定了pSVDV的TCID50和LD50,并与亲本毒进行了比较,结果显示,pSVDV与亲本毒的毒力差别不显著.结果表明,猪SVDVHK/70的感染性cDNA克隆已经成功构建,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础.
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