【摘 要】
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目的 探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法 选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的
【机 构】
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郑州大学第一附属医院口腔科,河南 郑州,450052;山东大学口腔医学院?口腔医院特诊科,山东 济南250012;山东省口腔组织再生重点实验室,山东 济南250012;山东省口腔生物材料与组织再生工程
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目的 探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法 选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miR-NAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检测DSPP、Runx2的表达,挑选表达量高的miR-222-5p组,Western blotting检测DSPP、Runx2蛋白水平的表达.生物信息学靶基因预测miR-222-5p的潜在靶基因,构建靶基因野生型/突变型双荧光素酶报告基因载体,与miR-222-5p共转染HEK 293T,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,证明miR-222-5p和预测的靶基因之间的关系.Western blotting验证miR-222-5p转染SCAP后靶基因的表达.进一步研究抑制内源性miR-222-5p和干扰靶基因对SCAP成骨/成牙本质向分化的影响.结果 19个miRNAs表达与芯片结果一致,其中miR-222-5p表达量高;转染miR-222-5p组DSPP、Runx2的mRNA及蛋白表达明显上调;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验确认人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)是miR-222-5p的直接靶基因,而且过表达miR-222-5p抑制SFRP4表达;干扰SFRP4可以有效地逆转miR-222-5p inhibitor对DSPP表达的抑制作用.结论 miR-222-5p通过靶向调节SFRP4促进SCAP成骨/成牙本质向分化.
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