【摘 要】
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血浆中组织因子 (TF)的过量表达与许多病理过程密切相关。TF抑制物有可能防治这些疾病。设计了两种可溶性组织因子 (sTF)的突变体 (MCsTF和MFsTF) ,突变了协同催化的功能域 ,
【机 构】
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复旦大学医学院分子遗传教研室; 复旦大学医学院分子遗传教研室 上海200032; 上海200032; 上海200032;
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血浆中组织因子 (TF)的过量表达与许多病理过程密切相关。TF抑制物有可能防治这些疾病。设计了两种可溶性组织因子 (sTF)的突变体 (MCsTF和MFsTF) ,突变了协同催化的功能域 ,保留与因子VII/VIIa结合的功能域 ,使突变体竞争性抑制野生型TF的功能。用PCR的方法 ,对可溶性组织因子cDNA基因进行了点突变 ,并实现了在大肠杆菌中高效表达。rsTF、rMCsTF和rMFsTF的促凝活性研究表明 ,rMFsTF的激活X因子活性和促凝血作用相当于rsTF的 10 % ,而rMCsTF几乎完全失去了激活X因子活性和促凝血作用。rMCsTF和rMFsTF与VII/VIIa因子形成复合物对激活X因子的催化特异常数 (kcat/Km)分别是FVII/VIIa·rsTF的 2 .0 %和 3.7% ,也说明突变体与VII/VIIa形成的复合物对激活X因子催化活性显著降低。rMCsTF和rMFsTF对rsTF活性抑制动力学研究及体外活性研究表明 ,两种突变体均有抑制rsTF活性和抑制兔脑粉的促凝活性作用 ,抑制作用呈量效关系
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