【摘 要】
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目的 NS1蛋白在流感病毒复制和传播中起到重要的调节作用,其功能多样,如能调节宿主细胞的蛋白合成、诱导感染细胞的凋亡以及拮抗IFN作用等,此外还有许多功能至今尚未明了.因
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目的 NS1蛋白在流感病毒复制和传播中起到重要的调节作用,其功能多样,如能调节宿主细胞的蛋白合成、诱导感染细胞的凋亡以及拮抗IFN作用等,此外还有许多功能至今尚未明了.因此,研制一个特异性高的抗NS1抗体,对NS1蛋白功能的进一步研究起到重要作用.方法 RT-PCR扩增流感病毒NS1基因,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+)中.然后在大肠埃希菌BL21中表达,用切胶纯化方法获取NS1融合蛋白.用该蛋白免疫新西兰大白兔,制备效价较高的多克隆抗体,并测定其效价(间接ELISA法).用病毒感染细胞实验、Western印迹法和间接免疫荧光实验等方法,观察病毒复制过程中NS1蛋白的表达及细胞定位情况.结果 首先构建了能表达NS1蛋白的质粒,并经原核细胞表达获得了NS1蛋白.然后用该蛋白免疫大白兔,获得了效价较高(1∶256 000)的抗NS1蛋白抗体.实验发现,该抗体可以特异性结合非依赖亚型的甲型流感病毒NS1蛋白.病毒感染后6h即可以检测到NS1蛋白,随着病毒复制时间的延长NS1蛋白表达量变化不明显；24h后NS1蛋白主要分布于细胞核内并能定位于核仁中,也有部分位于细胞质.结论 本研究通过原核表达获得了NS1蛋白,并利用常规的免疫方法获得了效价较高的抗NS1多克隆抗体.所制备的多克隆抗体能够有效定位NS1蛋白的表达,并且能和甲型流感病毒各亚型结合,具有较高的特异性.该抗体不仅能用于NS1蛋白功能及其对宿主细胞影响的研究,而且可用于鉴别诊断猪或其他动物中的病毒感染还是接种疫苗后的反应,有较好的开发应用前景.
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