研究桔梗皂苷D对人肝癌细胞株HepG2与SMMC-7721细胞放射敏感性的作用,并探讨其相关作用机制。
方法四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度不同处理时间桔梗皂苷D对细胞存活率的影响;预先给予细胞5 μg/ml桔梗皂苷D处理24 h,经过不同照射剂量的X射线照射,细胞克隆形成实验检测桔梗皂苷D对细胞的辐射增敏作用,计算准域剂量(Dq),平均致死剂量(D0),外推数(N),放射增敏比SER及不同照射剂量作用下的存活分数(SF),并依据多靶单击型模型公式SF = l-(l-e-D/D0)N拟合细胞存活曲线;流式细胞仪检测细胞周期的分布;Western blot检测细胞中磷酸化磷脂酰肌醇激酶(pPI3k)、磷酸化蛋白激酶(pAkt)、核因子(NF)-κB与磷酸化核因子抑制蛋白(pIκBα)的蛋白表达变化。据资料不同分别单因素方差分析(ANOVA)、t检验或LSD检验进行统计学分析。
结果桔梗皂苷D降低两种细胞存活率,且该抑制作用呈时间与剂量依赖性,HepG2细胞24 h的IC50为(24.2±0.61)μg/ml,48 h的IC50为(7.68±0.46) μg/ml;SMMC-7721细胞24 h的IC50为(23.8±0.57) μg/ml,48 h的IC50为(8.63±0.86)μg/ml;桔梗皂苷D联合放射处理后,Dq(P = 0.002)、D0(P = 0.002)和N值(P = 0.003)均显著降低,细胞存活曲线明显左移,放射增敏比SER分别为1.347±0.04(HepG2)与1.418±0.05(SMMC-7721);此外,桔梗皂苷D显著降低放射引起的两种细胞周期G2/M期比例的上升,以及pPI3k(P = 0.002)、pAkt(P = 0.003)与NF-κB(P = 0.002)蛋白表达的增加,pIκBα(P = 0.003)蛋白的表达降低。
结论桔梗皂苷D增加人肝癌细胞株HepG2与SMMC-7721细胞的放射敏感性,其机制可能与桔梗皂苷D增强发射线对细胞生长抑制作用、抑制PI3k/Akt及NF-κB通路的激活有关。