【摘 要】
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【目的】水稻异源三聚体G蛋白α亚基在植物生长与逆境应答中具有重要的生物学功能，在水稻中花11号品种中创制Gα蛋白编码基因DWARF1（D1）的突变体，为水稻功能基因组学研究提供材料。【方法】在中花11号的D1基因座位上设计靶向其外显子的sgRNA序列，构建CRISPR/Cas9载体，转化中花11号胚愈伤组织，经过抗性愈伤组织筛选和诱导分化后，对再生植株进行鉴定。【结果】筛选到3个含有不同编辑形式的
【机 构】
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广东省农业科学院农业生物基因研究中心/广东省农作物种质资源保存与利用重点实验室
【基金项目】
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广东省农业科学院新兴团队项目（202131TD）;广东省农业科学院科技人才引进专项（R2021YJ-QG005,R2021YJ-YB3011）； 广东省自然科学基金（2021A1515110103）；
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【目的】水稻异源三聚体G蛋白α亚基在植物生长与逆境应答中具有重要的生物学功能，在水稻中花11号品种中创制Gα蛋白编码基因DWARF1（D1）的突变体，为水稻功能基因组学研究提供材料。【方法】在中花11号的D1基因座位上设计靶向其外显子的sgRNA序列，构建CRISPR/Cas9载体，转化中花11号胚愈伤组织，经过抗性愈伤组织筛选和诱导分化后，对再生植株进行鉴定。【结果】筛选到3个含有不同编辑形式的d1突变株系，实时荧光定量PCR分析发现，D1 mRNA水平显著降低，表明无义突变介导的D1 mRNA降解过程亦被触发。在3个d1突变株中进一步鉴定到不含潮霉素抗性基因、不含载体骨架的植株，繁育后可以得到无转基因痕迹、稳定遗传的d1敲除植株。对d1突变株的生长、发育情况进行观察发现，中花11号背景下d1突变株显著变矮、穗明显变小，株高和穗长为中花11号野生型的50%～60%。种子变小及变圆，同时，种子长宽比和千粒重降低约40%。【结论】获得有效移码突变的中花11号背景d1突变株系，为进一步研究G蛋白及其相关基因的功能创制遗传材料。
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