【摘 要】
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目的:构建小鼠cdc25B蛋白特定序列的原核表达载体,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法:采用PCR方法从小鼠cdc25B野生型及位点突变型蛋白编码序列中扩增出约360
【机 构】
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中国医科大学基础医学院生理学教研室,辽宁省人民医院检验科,中国医科大学实验技术中心三部,中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
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目的:构建小鼠cdc25B蛋白特定序列的原核表达载体,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法:采用PCR方法从小鼠cdc25B野生型及位点突变型蛋白编码序列中扩增出约360个碱基的片段,构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后进行融合蛋白表达.Western blot鉴定表达产物.结果:构建出带有GST标签的原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达出相对分子质量(Mr)为40000的重组蛋白质,经Western blot鉴定,可与GST单克隆抗体结合,发生特异性反应.结论:利用原核表达系统成功表达出小鼠cdc25B蛋白特定序列的蛋白质,为进一步探讨与其他蛋白相互作用提供了基础.
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