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目的建立高效液相色谱法测定乙酰胺注射液有关物质的方法。方法采用phenomenex Gemini C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为0.05 mol.L-1辛烷磺酸钠（用磷酸调节pH值至3.0）-乙腈=95∶5,检测波长：210nm,流速：1.0 mL.min-1。结果乙酰胺与杂质能完全分离;最小检出量为2.0 ng。结论本方法操作简便、灵敏准确,专属性强,可用于乙酰胺注射液有关物质的检测。