探讨姜黄挥发油(TVO)联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)A431细胞增殖、凋亡的影响及机制。
方法取对数生长期A431细胞,用5、10、20、40、80 mg/L TVO处理,对照组用含有1%二甲基亚砜(DMSO)的DMEM高糖培养基处理,24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况。另取部分A431细胞,分为4组,分别用含1%DMSO的DMEM高糖培养基(对照组)、40 mg/L TVO(TVO组)、10 mg/L顺铂(顺铂组)、40 mg/L TVO和10 mg/L顺铂(TVO+顺铂组)处理24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3、Caspase-9酶活性;Western印迹检测Caspase-3、P糖蛋白表达。
结果5、10、20、40、80 mg/L TVO作用A431细胞24 h,对细胞增殖抑制率分别是(12.83 ± 6.4)%、(16.27 ± 11.4)%、(21.61 ± 9.1)%、(33.11 ± 2.0)%和(46.00 ± 3.3)%,与对照组(4.03 ± 1.4)%比较差异均有统计学意义(P < 0.05);24 h时抑制50%细胞增殖的TVO浓度为(61.66 ± 1.03)mg/L;TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞增殖抑制率显著上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P < 0.05),联合用药有协同作用,联合指数(CI)为1.366(P < 0.05)。TVO组、顺铂组细胞均不同程度变圆并出现凋亡,TVO+顺铂组细胞明显减少,出现大量细胞碎片。TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞Caspase-3酶活性分别是1.117 ± 0.095、1.381 ± 0.089、1.520 ± 0.115,Caspase-9酶活性分别是1.259 ± 0.059、1.829 ± 0.171、2.760 ± 0.297,Caspase-3蛋白表达量分别是1.156 ± 0.006、1.296 ± 0.021、1.482 ± 0.016,P糖蛋白表达量分别是1.311 ± 0.011、1.169 ± 0.012、0.528 ± 0.014,其中TVO+顺铂组细胞Caspase-3、Caspase-9酶活性及Caspase-3蛋白表达量显著高于TVO组和顺铂组,P糖蛋白表达量显著低于TVO组和顺铂组,差异均有统计学意义(P < 0.01)。
结论姜黄挥发油与顺铂联用可协同抑制人皮肤鳞癌A431细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化Caspase系统并降低P糖蛋白表达相关。