【摘 要】
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目的 探讨沉默CCR7受体干扰树突状细胞成熟,对肾小管上皮细胞转化的影响及作用机制.方法 DC2.4细胞分别转染siRNA-NC和siRNA-CCR7,培养48 h后,检测细胞内CCR7蛋白水平,以评估干扰效果.收集siRNA-CCR7及siRNA-NC组肾间质树突状细胞(dendritic cells,DCs)上清液,酶联免疫吸附测定检测上清液中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic pro-tein 1,MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflamm
【机 构】
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中国人民解放军北部战区空军医院心肾内科,沈阳110042
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目的 探讨沉默CCR7受体干扰树突状细胞成熟,对肾小管上皮细胞转化的影响及作用机制.方法 DC2.4细胞分别转染siRNA-NC和siRNA-CCR7,培养48 h后,检测细胞内CCR7蛋白水平,以评估干扰效果.收集siRNA-CCR7及siRNA-NC组肾间质树突状细胞(dendritic cells,DCs)上清液,酶联免疫吸附测定检测上清液中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic pro-tein 1,MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和生长转化因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平,制备诱导培养基,继续培养肾小管上皮细胞HK-2.48 h后蛋白质印迹法和免疫荧光分别检测诱导培养HK-2细胞上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(抗人E-钙黏蛋白、TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM A)、波形蛋白的表达和分布情况.结果 沉默DCs表面趋化因子受体CCR7,沉默组DCs上清液中MCP-1、TGF-β1水平下降且MIP-1α水平上调,差异有统计学意义(P<0.05).分别收集siRNA-CCR7及siRNA-NC组DCs上清液,诱导培养HK-2细胞,蛋白质印迹法结果表明与阴性对照组相比,siRNA-CCR7+HK-2组TGF-β1、波形蛋白和α-SMA的蛋白表达明显下调,而抗人E-钙黏蛋白表达明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05).免疫荧光检测结果表明,与阴性对照组相比,siRNA-CCR7+HK-2组TGF-β1、波形蛋白和α-SMA的蛋白表达及分布水平减少,而抗人E-钙黏蛋白表达及分布增加,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成熟的DCs细胞可促进HK-2细胞发生EM T,沉默CCR7,干扰DCs成熟,可阻断HK-2细胞EM T,可能与其上清液中分泌的MCP-1和MIP-1α含量不同有关.
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