【摘 要】
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为探究甘草转运蛋白基因reticulon-like protein B1 (GuRTNLB1)对甘草酸合成途径下游关键酶基因的调控作用,本研究基于甘草转录组数据,通过RT-PCR技术得到了GuRTNLB1基因CDS全长,使用无缝克隆法将其构建到携带CaMV 35S启动子的植物表达载体pCAMBIA2300上,然后热击转化发根农杆菌ACCC10060,用于侵染甘草胚轴,经过共培养和抗生素筛选培养,获
【机 构】
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中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室濒危药材繁育国家工程实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划课题(2017YFC1701403)资助;
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为探究甘草转运蛋白基因reticulon-like protein B1 (GuRTNLB1)对甘草酸合成途径下游关键酶基因的调控作用,本研究基于甘草转录组数据,通过RT-PCR技术得到了GuRTNLB1基因CDS全长,使用无缝克隆法将其构建到携带CaMV 35S启动子的植物表达载体pCAMBIA2300上,然后热击转化发根农杆菌ACCC10060,用于侵染甘草胚轴,经过共培养和抗生素筛选培养,获得过量表达GuRTNLB1基因的甘草毛状根根系,利用PCR法验证转基因毛状根,并利用RT-qPCR法测定甘草毛状根根系中甘草酸代谢途径下游酶基因的表达水平。PCR扩增结果显示,得到长度约760、580 bp的基因片段,分别与甘草GuRTNLB1基因和发根农杆菌rolC基因长度一致,表明成功构建了甘草转基因毛状根培养体系;RT-qPCR结果显示,过表达GuRTNLB1增强了甘草酸途径下游关键酶基因的表达。本研究为解析转运蛋白基因GuRTNLB1调控甘草酸合成的分子机制提供了理论依据,筛选出2个过量表达GuRTNLB1基因甘草毛状根根系后续也可用于扩大培养,为离体提高甘草酸含量奠定良好的基础。
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