目的 通过siRNA(RNAi)干扰选择性下调TLR4基因的表达,探讨高糖对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)及其转接子髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和炎性因子分泌的影响.方法 设计并合成3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段,以带有红色荧光的BLOCK-IT Alexa Fluor作为阴性对照,荧光显微镜下观察细胞转染效率,实时定量PCR检测TLR4 mRNA的表达变化.挑选基因沉默效率最佳的siRNA用于进一步实验,细胞被分5组:(1)正常糖对照组(NG);(2)高糖组(HG);(3)HG+血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)+空转组;(4) HG+AngⅡ+siRNA组;(5) HG+AngⅡ+厄贝沙坦(IrB)组.采用实时定量PCR法检测TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western印迹检测TLR4、MyD88及核因子kappa B(NF-kB)蛋白表达;ELISA法检测巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)的表达.结果 与NG组比较,高糖组TLR4/MyD88 mRNA及TLR4、MyD88、NF-kB蛋白表达水平明显上调(均P< 0.01),细胞上清MCP-1、IL-6水平亦升高(P<0.01);空转组与高糖组比较差异无统计学意义(P> 0.05);SiRNA组、ARB组TLR4、MyD88 mRNA明显下调,TLR4、MyD88及NF-kB蛋白明显下调,MCP-1、IL-6表达亦下调(均P<0.01).结论 高糖上调小管上皮细胞TLR4/MyD88信号及炎性细胞因子表达,AngⅡ可增强此效应;特异性基因沉默可阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号通路的激活,并下调炎性介质的释放;TLR4信号通路在高糖、高肾素环境肾小管上皮细胞炎性反应机制中发挥关键作用。
SiRNA干扰对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4/转接子髓分化因子88信号通路的影响
【摘 要】
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目的 通过siRNA(RNAi)干扰选择性下调TLR4基因的表达,探讨高糖对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)及其转接子髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和炎性因子分泌的影响.方法 设计并合成3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段,以带有红色荧光的BLOCK
【机 构】
:
330006南昌大学附属第一医院肾内科,330006南昌大学附属第一医院肾内科,湖北省黄石市二医院,330006南昌大学附属第一医院肾内科,330006南昌大学附属第一医院肾内科,330006南昌大学
【出 处】
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中华肾脏病杂志
【发表日期】
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2013年29期
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