论文部分内容阅读
摘 要：本文采用高校液相测定了复方肺心安片中黄芪苷的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1，柱温：30℃。黄芪苷在20～350微克/毫升范围内呈良好的线性关系。黄芪苷的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于复方肺心安片中黄芪苷的含量测定。
关键词：复方肺心安片；黄芪苷；含量
复方肺心安片主要用于治疗慢性肺心病。黄芪为复方肺心安片主要成分之一。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。清朝绣宫内称其为“补气诸药之最”，意思是说经常用黄芪煎汤或用黄芪泡水代茶饮，具有良好的防病保健作用。黄芪属补气良药，常用于虚脱、休克等急症，效果较好。《日华子本草》记载：“助气壮筋骨，长肉补血。”黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、苦味素、黄芪皂苷、甜菜碱、胆碱、叶酸及硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。黄芪有增强机体免疫功能、保肝、、调节血压、抗病毒性心肌炎、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。本文采用高校液相测定了复方肺心安片中黄芪苷的含量。
1 仪器与试药
JHT2800高效液相色谱仪（深圳市天友利标准光源有限公司）；SB25-12DTS双频超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技术有限公司）；全自动内校分析天平（常州市幸运电子设备有限公司）；恒温油槽（南京恒星实验设备有限公司）；DBT-IV-20高端型超纯水机（杜伯特（北京）科技有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。黄芪苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海展云化工有限公司）、乙醇（上海展云化工有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、甲醇（安徽胜达化工科技有限公司）、冰醋酸（安徽胜达化工科技有限公司）、磷酸氢二钠（安徽胜达化工科技有限公司）、三乙胺（安徽胜达化工科技有限公司）、正丁醇（安徽胜达化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1。理论板数按黄芪苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取复方肺心安片，研细，精密称取，加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，蒸干滤液，残渣用30毫升纯化水溶解，用水饱和过的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用50%乙醇溶液溶解转移至25毫升容量瓶内并分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芪苷对照品约10毫克，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100微克的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取除黄芪以外的药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芪苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（微克）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪苷对照品在20～350微克/毫升范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取黄芪苷对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的复方肺心安片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.89%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品黄芪苷峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明黄芪苷至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的黄芪苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定复方肺心安片三批样品中黄芪苷的含量，含量為2.35毫克/克、2.16毫克/克、2.22毫克/克。
3 讨论
分别考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），甲醇：水=55∶45，各加1%冰醋酸，甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），乙腈-水，梯度洗脱（0～30min，乙腈20.5%，30～70min，乙腈20.5%→38%），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氢钠∶甲醇（体积比为15∶85），不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于复方肺心安片中黄芪苷的含量测定。复方肺心安片中黄芪苷的含量应为不少于2毫克/克。
参考文献
[1]王玲玲，孙金玉，林真丹，孙佳稷，高晗，尚庆坤.高效液相色谱多检测器联用并结合光谱、质谱技术对不同黄芪样品中黄芪甲苷伴生组分的研究[J].分子科学学报，2017（06）.
[2]梁瑾，封士兰，刘小花，党子龙，梁建娣，杨春霞.黄芪药材的高效液相色谱指纹图谱及主要成分的含量测定方法研究进展[J].西北药学杂志，2012（05）.
[3]刘建伟，李青，崔勇，张冠英，马莹，张丽薇，张博，姜楠.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定保健食品中黄芪甲苷含量[J].中国卫生工程学，2009（06）.
[4]王鹏，赵承孝，李青山，张淑秋.高效液相色谱-蒸发光散射测定蒙古黄芪中黄芪甲苷的含量及其提取工艺的优化[J].中国药物与临床，2010（02）.
[5]李代晓，吕英超，李云霞.高效液相色谱蒸发光散射检测器测定复方石韦片中黄芪甲苷含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（10）.
关键词：复方肺心安片；黄芪苷；含量
复方肺心安片主要用于治疗慢性肺心病。黄芪为复方肺心安片主要成分之一。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。清朝绣宫内称其为“补气诸药之最”，意思是说经常用黄芪煎汤或用黄芪泡水代茶饮，具有良好的防病保健作用。黄芪属补气良药，常用于虚脱、休克等急症，效果较好。《日华子本草》记载：“助气壮筋骨，长肉补血。”黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、苦味素、黄芪皂苷、甜菜碱、胆碱、叶酸及硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。黄芪有增强机体免疫功能、保肝、、调节血压、抗病毒性心肌炎、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。本文采用高校液相测定了复方肺心安片中黄芪苷的含量。
1 仪器与试药
JHT2800高效液相色谱仪（深圳市天友利标准光源有限公司）；SB25-12DTS双频超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技术有限公司）；全自动内校分析天平（常州市幸运电子设备有限公司）；恒温油槽（南京恒星实验设备有限公司）；DBT-IV-20高端型超纯水机（杜伯特（北京）科技有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。黄芪苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海展云化工有限公司）、乙醇（上海展云化工有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、甲醇（安徽胜达化工科技有限公司）、冰醋酸（安徽胜达化工科技有限公司）、磷酸氢二钠（安徽胜达化工科技有限公司）、三乙胺（安徽胜达化工科技有限公司）、正丁醇（安徽胜达化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1。理论板数按黄芪苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取复方肺心安片，研细，精密称取，加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，蒸干滤液，残渣用30毫升纯化水溶解，用水饱和过的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用50%乙醇溶液溶解转移至25毫升容量瓶内并分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芪苷对照品约10毫克，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100微克的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取除黄芪以外的药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芪苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（微克）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪苷对照品在20～350微克/毫升范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取黄芪苷对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的复方肺心安片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.89%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品黄芪苷峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明黄芪苷至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的黄芪苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定复方肺心安片三批样品中黄芪苷的含量，含量為2.35毫克/克、2.16毫克/克、2.22毫克/克。
3 讨论
分别考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），甲醇：水=55∶45，各加1%冰醋酸，甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），乙腈-水，梯度洗脱（0～30min，乙腈20.5%，30～70min，乙腈20.5%→38%），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氢钠∶甲醇（体积比为15∶85），不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于复方肺心安片中黄芪苷的含量测定。复方肺心安片中黄芪苷的含量应为不少于2毫克/克。
参考文献
[1]王玲玲，孙金玉，林真丹，孙佳稷，高晗，尚庆坤.高效液相色谱多检测器联用并结合光谱、质谱技术对不同黄芪样品中黄芪甲苷伴生组分的研究[J].分子科学学报，2017（06）.
[2]梁瑾，封士兰，刘小花，党子龙，梁建娣，杨春霞.黄芪药材的高效液相色谱指纹图谱及主要成分的含量测定方法研究进展[J].西北药学杂志，2012（05）.
[3]刘建伟，李青，崔勇，张冠英，马莹，张丽薇，张博，姜楠.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定保健食品中黄芪甲苷含量[J].中国卫生工程学，2009（06）.
[4]王鹏，赵承孝，李青山，张淑秋.高效液相色谱-蒸发光散射测定蒙古黄芪中黄芪甲苷的含量及其提取工艺的优化[J].中国药物与临床，2010（02）.
[5]李代晓，吕英超，李云霞.高效液相色谱蒸发光散射检测器测定复方石韦片中黄芪甲苷含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（10）.