目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的气道黏蛋白(MUC)5AC的调节机制.方法 培养正常人气道上皮细胞HBE16,给予SphK1特异性抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)处理及转染SphK1的小干扰RNA(siRNA)后,再各施以TNF-α刺激,四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞增殖活力,Western blot法检测各组SphK1、环氧化酶2(COX-2)、磷酸化P38(p-P38)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和IκBα蛋白相对含量,酶联免疫分析法检测各组MUC5AC、前列腺素E2(PGE2)和环单磷酸腺苷(cAMP)的相对含量,荧光素酶报告基因系统测定cAMP反应结合蛋白(CREB)和核因子-κB(NF-κB)的相对活性,RT-PCR检测各组SphK1和MUC5ACmRNA的表达水平,免疫荧光法检测胞内MUC5AC含量.结果 与对照组相比,TNF-α组的SphK1mRNA和蛋白水平显著升高(均P＜0.01),COX-2、PGE2、cAMP、p-P38和p-ERK的含量明显增加(均P＜0.01),IκBα含量明显降低(P＜0.01),CREB和NF-κB的活性明显增强(均P＜0.01),MUC5AC mRNA和蛋白含量亦显著高于对照组(均P＜0.01);与TNF-α组相比,给予DMS处理后COX-2、PGE2、cAMP、p-P38和p-ERK的含量明显降低(均P＜0.01),IκBα含量显著增加(P＜0.01),CREB和NF-κB的活性明显减弱(均P＜0.01),MUC5AC mRNA和蛋白含最也显著降低(均P＜0.01),转染SphK1 siRNA后上述指标出现同DMS处理一致的变化(均P＜0.01).结论 SphK1参与调节了TNF-α所诱导的MUC5AC高表达过程中的主要信号因子及转录因子的表达,可能是MUC5AC合成及分泌过程中的重要调节因子。
鞘氨醇激酶1对肿瘤坏死因子α诱导的气道黏蛋白5AC的调节作用
【摘 要】
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目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的气道黏蛋白(MUC)5AC的调节机制.方法 培养正常人气道上皮细胞HBE16,给予SphK1特异性抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)处理及转染SphK1的小干扰RNA(siRNA)后,再各施以TNF-α刺激,四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞增殖活力,Western blot法检测各组SphK1、环氧化酶2(COX-2)、磷酸化P
【机 构】
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400010,重庆医科大学附属第二医院呼吸内科,400010,重庆医科大学附属第二医院呼吸内科,俄罗斯医学科学院远东呼吸生理与病理中心,俄罗斯医学科学院远东呼吸生理与病理中心,400010,重庆医科大
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2011年91期
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