【摘 要】
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通过不对称PCR技术和基因芯片技术建立一种准确、快速和高敏感性的检测肉中常见食源性致病菌的方法.用FTA滤膜从食品样品中直接提取模板DNA,用玻片作基因芯片的固相栽体.选择
【机 构】
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河北农业大学食品科技学院,保定,071001
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通过不对称PCR技术和基因芯片技术建立一种准确、快速和高敏感性的检测肉中常见食源性致病菌的方法.用FTA滤膜从食品样品中直接提取模板DNA,用玻片作基因芯片的固相栽体.选择常见的可引起食物中毒的15株菌的16SrDNA基因的一个片段作为目的基因.设计这段基因的一对通用引物,下游引物用Cy5标记.设计25条种属的特异性探针,将它们氨基化修饰并点到玻片上,将不时称PCR的15种扩增产物与制作好的基因芯片杂交,用genepix4分析杂交结果.结果表明:10株食源性致病菌(金黄色葡萄球菌、肉毒梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、宋内氏志贺氏菌、霍乱孤菌、普通变形杆菌、拟态弧菌、单核增生李斯特菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、腊样芽孢杆菌)的检测具有高敏感性和特异性;副溶血性弧菌的敏感性相对较低;河流弧菌同副溶血性弧菌存在很弱的错杂交:乙型溶血性链球菌的检测同单核增生李斯特菌和腊样芽孢杆菌存在很弱的错杂交,但是均不影响检测结果.大肠杆菌0157:H7和沙门氏菌由于同源性非常高,可以通过多重PCR方法检测出来.整个样品的检测耗时6h.基因芯片与其它检测方法相比有很大的优势,它不仅准确、快速、高效.而且高通量,可广泛应用于食源性致病菌感染的诊断、应对和控制.
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