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【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料（肠系膜淋巴结）涂片、抗酸染色后进行显微镜观察；同时，提取肠系膜淋巴结组织DNA，采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因，并进行序列测定与分析。【结果】组织涂片染色镜检后可见抗酸染色阳性菌株；15900基因及亚型分型基因的检测和序列分析结果表明，目标菌株为Ⅱ型（牛型）副结核分支杆菌。【结论】采用镜检及分子检测等手段确定从所送检绵羊肠系膜淋巴结组织为Ⅱ型（牛型）副结核分支杆菌感染样本。