人脐带间充质干细胞外泌体miR-100对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞炎症的影响

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目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-100对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞炎症的影响。方法 选取2021年3月至2021年12月于石家庄市第四医院生殖医学科就诊的70例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期70例因输卵管因素助孕治疗的非PCOS患者为对照(对照组),比较两组患者的临床基线资料及IVF妊娠结局相关参数。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测患者颗粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。采用二元Logistic回归分析影响PCOS的危险因素。RT-qPCR验证hUCMSCs外泌体(exos)中miR-100的表达水平。合成miR-100模拟物及其对照转染至人卵巢颗粒细胞KGN中,RT-qPCR检测miR-100的表达水平。在脂多糖(LPS)诱导的KGN炎症细胞模型中转染miR-100模拟物及其对照,RT-qPCR检测TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平。采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-100对靶基因的调控作用。miR-100过表达后,Western blotting检测KGN炎症模型中Toll样受体4(TLR4)、p-IκBa、IκBa、p-p65、p65蛋白水平。结果 与对照组比较,PCOS组患者体质量指数(BMI)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、窦卵泡数(AFC)、获卵数升高(P值分别为<0.001、<0.001、0.020、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001);但MII卵率和2PN受精率降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。与对照组患者比较,PCOS组患者TNF-α、IFN-γ的mRNA水平升高,差异有统计学意义(P均<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,LH、HOMA-IR、TNF-α、IFN-γ是影响PCOS的危险因素(P值分别为0.031、0.001、0.030、0.005)。RT-qPCR结果显示,miR-100在hUC-MSCs-exos中富集,miR-100过表达可抑制LPS诱导的颗粒细胞炎症因子TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平(P值分别为0.041、<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-100能结合TLR4 mRNA 3’UTR并有效抑制其表达(P<0.001)。Western blotting结果显示,与miR-NC组比较,过表达miR-100后KGN炎症模型中TLR4、p-IκBa和p-p65蛋白表达降低(P值分别为<0.001、<0.001、0.049),IκBa蛋白水平升高(P<0.001)。结论 PCOS患者颗粒细胞TNF-α、IFN-γ表达升高,是影响PCOS的危险因素。hUC-MSCs来源的外泌体miR-100可通过靶向TLR4/NF-κB信号通路抑制PCOS颗粒细胞的炎症反应。
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