观察细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)抑制剂Roscovtine对皇家外科学院(RCS)大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的影响。
方法RCS雄性大鼠30只，随机数字表法随机分为早期干预组、中期干预组、晚期干预组，每组10只。分别于出生后17、25、35 d，给予右眼玻璃体腔注射Cdk5抑制剂Roscovitine 4 μl作为实验眼；左眼玻璃体腔注射Roscovitine溶剂二甲基亚砜4 μl作为对照眼。早期干预组、中期干预组、晚期干预组大鼠分别于出生后25、35、45 d处死，摘除眼球作视网膜切片，采用苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜外核层厚度变化；采用免疫组织化学染色观察Cdk5、p25及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleave-caspase 3)的阳性表达；采用原位末端标记法(TUNEL)检测视网膜凋亡细胞的表达。取视网膜组织，采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠视网膜中Cdk5、p25及cleave-caspase 3的蛋白表达。对Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达与凋亡细胞表达两两变量之间行多变量偏相关分析。
结果早期干预组、中期干预组大鼠实验眼外核层厚度均较对照眼厚，且早期干预组实验眼与对照眼外核层厚度的差异更明显。晚期干预组大鼠实验眼与对照眼的外核层厚度差异不明显。免疫组织化学染色结果显示，早期干预组、中期干预组实验眼外核层Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达均较对照眼降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。晚期干预组实验眼与对照眼外核层Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL检测结果显示，早期干预组、中期干预组大鼠实验眼视网膜外核层凋亡细胞表达较对照眼明显降低；晚期干预组大鼠实验眼与对照眼视网膜外核层凋亡细胞表达差异不明显。多变量偏相关分析结果显示，Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达与凋亡细胞表达两两变量之间均呈明显相关性(P<0.05)。Western blot检测结果显示，早期干预组、中期干预组大鼠实验眼视网膜中cleave-caspase 3蛋白表达较对照眼明显降低，且早期干预组实验眼与对照眼视网膜中cleave-caspase 3蛋白表达之间的差异更明显。晚期干预组实验眼与对照眼视网膜中cleave-caspase 3蛋白表达的差异不明显。
结论Cdk5抑制剂Roscovtine可能对视网膜光感受器细胞的凋亡过程起到一定延缓作用。