探讨半乳糖凝集素-1(Galectin-1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与脱细胞真皮基质(ADM)补片共培养的可行性。
方法将Ad-绿色荧光蛋白(GFP)-Galectin-1转染间充质干细胞(MSCs)后,荧光显微镜下观察荧光表达,通过实时定量反转录聚合酶联反应(RT-qPCR)法检测Galectin-1基因表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Galectin-1蛋白表达,Western blot检测肌间线蛋白(Desmin)表达,共聚焦荧光显微镜下观察Ad-GFP-Galectin-1转染BMSCs与ADM补片共生长情况。
结果Ad-GFP-Galectin-1转染BMSCs后,荧光显微镜下可见绿色荧光,72 h达高峰;RT-qPCR检测Galectin-1 mRNA的表达,Galectin-1 mRNA在空白对照组(PBS组)中相对表达水平为1.00;在Ad-GFP-Galectin-1(Ad-GFP-Galectin-1组)和Ad-GFP(Ad-GFP组)转染BMSCs中相对表达水平分别为4.11和1.09;ELISA证实BMSCs表达Galectin-1、Galectin-1表达量在Ad-GFP-Galectin-1组、Ad-GFP组和PBS组中分别为48 h:(197.28±8.78)、(25.52±1.56)、(24.53±2.96)μg/L;72 h:(264.33 ±5.43)、(25.40±2.06)、(25.46±1.13)μg/L;96 h:(172.41±3.61)、(25.22±1.61)、(28.01± 1.26)μg/L;120 h:(155.53±7.25)、(24.84±2.35)、(26.65±1.54)μg/L。Western blot证实大鼠Desmin表达升高;共聚焦荧光显微镜下观察Ad-GFP-Galectin-1转染的BMSCs与ADM融合生长良好。
结论Galectin-1能诱导BMSCs合成Desmin;Ad-GFP-Galectin-1转染的BMSCs与脱细胞真皮基质(ADM)补片融合生长良好。