【摘 要】
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目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)应用于基因治疗的可行性。方法体外分离、培养并鉴定BMSCs,采用具有高效转染非分裂期细胞的慢病毒载系
【机 构】
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新疆医科大学第六临床医学院; 新疆医科大学第六附属医院脊柱外一科;
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科学基金面上项目(2017D01C261)
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目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)应用于基因治疗的可行性。方法体外分离、培养并鉴定BMSCs,采用具有高效转染非分裂期细胞的慢病毒载系统将miR-146a导入BMSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western Blot技术分别检测转染率、miR-146a及白介素-1(IL-1)受体相关激酶1(IRAK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白水平表达情况。结果经流式细胞技术鉴定第三代BMSCs中表达CD90、CD106,不表达CD45。慢病毒感染MSCs的感染复数为50最佳感染率可达80%。EGFP荧光表达自72 h时开始逐渐增强。转染的BMSCs中miR-146a高表达。结论 (1)通过贴壁筛洗法能够获取纯度较高的BMSCs。(2)通过携带miR-146a的慢病毒载体成功转染BMSCs,并下调靶蛋白IL-1 IRAK1和TRAF6。
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