【摘 要】
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[目的]观察生理状态下人骨肉瘤细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPKs)被磷酸化的过程。[方法]先进行ECFP-p38MAPK-Citrine(p38MAPK
【机 构】
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新疆地方民族与地方病教育部重点实验室; 石河子大学医学院第一附属医院检验科; 石河子大学医学院第一附属医院骨一科;
【基金项目】
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石河子大学课题(“TGFβ作用活细胞及p38MAPK信号通路的时空成像研究”,No.ZRKX2010ZD02-3)资助
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[目的]观察生理状态下人骨肉瘤细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPKs)被磷酸化的过程。[方法]先进行ECFP-p38MAPK-Citrine(p38MAPK biosensor)融合蛋白表达载体的构建及鉴定,然后转染MG-63细胞24h后观察转染效率和融合蛋白表达情况。在荧光显微镜下,应用Meta Flour FRET 4.6软件测量转化生长因子-β1刺激MG-63细胞前后p38MAPK biosensor的荧光能量共振转移的变化情况。[结果]p38MAPK biosensor转染效率达30%~40%,均匀分布在胞质和胞核中。转化生长因子-β1刺激MG-63细胞后,胞质和胞核内荧光能量共振转移比值(Citrine/CFP)迅速增高,历时约30min达到最大值。特异性p38MAPK抑制剂SB-203580与细胞共孵育后,FRET比值逐渐减小。[结论]应用荧光能量共振转移技术使我们在活细胞生理状态下,实时动态监测p38MAPK被磷酸化的时空信息。
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