大肠杆菌K12碱性磷酸酶基因的克隆表达

来源 :沈阳师范大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:lovely_fox
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大肠杆菌碱性磷酸酶是同二聚体金属酶,被phoA基因编码.采用PCR方法从大肠杆菌K12中扩增到碱性磷酸酶基因(phoA).用限制性内切酶BamHI和HindⅢ将片段插入克隆载体pETBlue-2.该基因被重组、转化后在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,而后进行SDS-PAGE检测及紫外吸收分析测OD410.克隆得到了phoA基因并实现了蛋白表达,碱性磷酸酶的活性提高了18,3倍,为进行组织化学、免疫印迹、突变分析等工作打下了坚实的基础.
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