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【摘要】 目的了解感染HIV病人中结核分枝杆菌感染情况。方法 使用抗酸染色和BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪来检测结核病人标本，以后者为最终诊断方法，对确认的结核感染病人做五种（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、比嗪酰胺）药物敏感性试验。结果 203 HIV患者中，3.94%（8/203）非结核分枝杆菌感染；1例淋巴瘤，确诊为结核分枝杆菌感染的有50人。做结核药敏患者中有85.17%敏感；MDR的耐药率为7.14%；耐多药的有7.14%。结论 我院收治的HIV感染病人对一线抗结核药物仍敏感。
【关键词】 免疫缺陷，HIV，结核分枝杆菌；一线抗结核药物，BACTEC MGIT 960
Mycobacterium Tuberculosis Infection in HIV Patients Analysis
WANG Ya-ling1, SU Jun-hua1
（Department of Laboratory Medicine, Third Municipal People’s Hospital, Kunming 650041,China）
【Abstract】 ObjectiveTo understanding of HIV patients with Mycobacterium Tuberculosis infection. MethodUse acid-fast staining and BACTEC MGIT 960 to detect specimens. BACTEC MGIT 960 is the final diagnosis. The confirmation of TB infected patiens for drug susceptibility testing(Include Streptomycin、Isoniazid、Rifampin、Ethambutol、Pyrazinamide). Result Eight cases are non-tuberculosis Mycobacterium infection in 203 of HIV-Infected patients. In patients with tuberculosis drug susceptibility ,85.17% sensitive 、7.14% MDR 、7.14% XDR. Conclusion HIV infectiong in our hospital patients are still sensitive to first-line drugs for tuberculosis.
【Key words】 Acquired immunodeficiency syndrome ,HIV, Mycobacterium Tuberculosis, first-line drugs of tuberculosis, BACTEC MGIT 960
近年来结核分枝杆菌感染病人发病人数有所回升，对抗结核药物耐药情况也十分严重。免疫缺陷病人易并发各种机会感染，结核是较常见的。而且随着HIV感染病例数逐年增加，使其也成了结核分枝菌耐药的因素之一。我院为艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染与结核人定点收治医院，结合本院的资源，整合检验科现有的检测技术，为进一步了解HIV感染合并结核病人耐药情况，对此我们做了以下研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1病例来源收集自2010年2月至2011年7月HIV感染病人的送检标本，包括痰液、支刷物、肺泡灌洗液、胸水、腹水、脑脊液、尿液、脓液及其他标本等。
1.1.2 仪器和试剂 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪及其配套试剂（包括MGIT培养管，MGITOADC营养添加剂、PANTA 杂菌抑制剂，SIRE联合药敏，PZA药敏试剂和PZA培养管）由美国BD公司生产；标本前处理液2% NaLC-NaOH、PH 6.8 PBS缓冲液、抗酸染液、革兰染液自配；改良中性罗氏培养基由郑州贝瑞特生物技术有限责任公司生产；结核分枝杆菌抗原检测试剂（胶体金法）由杭州创新生物检验技术公司生产,；TB-DNA检测由本院检验科PCR室协助完成（仪器：Roche LightCycler，试剂：结核分枝杆菌核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒，由中山大学达安基因股份有限公司生产）。
1.2 方法抗酸涂片和BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪対送检的标本进行检测。 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌检测系统按其操作指南操作。取制备好的接种液0.5 ml接种于MGIT培养管，同时取沉渣0.2 ml接种中性罗氏培养基，并进行涂片，待涂片干燥后进行抗酸染色，统计其初始涂片阳性率。
1.3 药敏试验采用比例法，同样由BACTEC MGIT 960完成，药敏操作按照BACTEC MGIT 960操作指南完成，BACTEC MGIT 960提供链霉素（Streptomycin,S）、异烟肼（Isoniazid,I）、利福平（Rifampin,R）、乙胺丁醇（Ethambutol,E）和吡嗪酰胺（Pyrazinamide,PZA）五种抗结核一线药，药物终浓度分别为1.0 ug/ml、0.1 ug/ml、1.0 ug/ml、5.0 ug/ml、100 ug/ml。药敏质控株H37RV。
1.4 结果判断及处理 BACTEC MGIT 960检出阳性后,取阳性培养管做抗酸染色和革兰氏染色，以确定是否为分枝杆菌。若抗酸染色阳性，视为分枝杆菌生长；抗酸染色阴性标本需再经过革兰氏染色确定有无其他细菌、真菌生长，如有即视为标本污染。中性罗氏培养基放置在37.0℃ 5% CO2孵育箱中孵育，每周观察两次，若发现可疑菌落，处理及判断同BACTEC MGIT 960培养。两者检测周期均为42天，42天无生长视为培养阴性。
1.5 菌型鉴定 首先涂片证实为分枝杆菌生长，取阳性管中培养物100ul，加于胶体金检测条中，15分钟观察结果，阳性说明为结核分枝杆菌，若检测结果为阴性，PCR TB-DNA证实仍为阴性，判为非结核分枝杆菌。
2 结果
2.1 病人基本情况所有送检的病人年龄平均38.19岁；BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪检培养阳性的男性与女性人数分别为30人和7人，其中非结核分枝杆菌阳性的均为男性；28例药物敏感性试验中男性病人21例，7例为女性。
2.2 阳性检出情况感染HIV病人共送检203 份标本，BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪检出结核分枝杆菌阳性标本60份，阳性检出率29.56%（60/203），其中结核分枝杆菌阳性标本为50例，阳性检出率24.63%（50/203）；检出8份标本为非结核分枝杆菌，阳性检出率3.94%（8/203）。抗酸涂片分枝杆菌阳性检出率18.23 %(37/203)。来自于非艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染病人的阳性检出率为36.51%（747/2046）。
2.3 药敏试验结果50份结核分枝杆菌确诊病人中由于同时送检一份以上标本、病人出院等原因，只对28份单株结核分枝杆菌阳性标本做了结核药物敏感性试验，有85.71%（24/28）人药敏结果五种一线抗结核药物全部敏感；MDR（同时对利福平和异烟肼耐药）有 7.14%（2/28）；7.14%(2/28)为耐多药。
3 讨论
根据本次研究203例送检的艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）（PLWHA）感染病人，有29.56%的结核分枝杆菌感染与艾维莉的研究[1]一致，高于汤卓的研究结果19.4%（151/778）。在3.94%非结核分枝杆菌感染。28份单株结核分枝杆菌阳性标本做了结核药物敏感性试验，有85.71%（24/28）人药敏结果五种一线抗结核药物全部敏感的结果，本院收治的PLWHA病人使用一线抗结核药物治疗可以达到治愈结核分枝杆菌感染的目的。
但据2005年最新评估显示, 目前中国现有PLWHA约65万人[3]。艾滋病患者由于机体免疫力降低, 容易通过内源性复燃、外源性感染或再感染患结核病, HIV 感染能够影响结核病的发展和转归, 而结核病感染又可加剧HIV 感染的病程。在发展中国家, 结核与HIV/ AIDS 双重感染的增高趋势比较明显, 被认为是发展中国家HIV 感染者最常见的机会性疾病, 常是免疫缺陷的第一个临床症状[4]。所以随着PLWHA人数在不断的增加，合并结核与非结核分枝杆菌的病人数量也在增加，又由于非结核分枝杆菌病人对抗结核药物天然耐药，结核耐药情况艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的病人做分枝杆菌培养及菌型鉴定非常重要，关系到艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染病人的生活质量与减少抗结核分枝杆菌耐药情况的发生。
参考文献
[1]艾维莉. 艾滋病与结核病双重感染的研究概况[ J ]. 内科, 2007, 2( 4 ) : 604- 606.
[2]汤卓，黄绍标, 韦彩云,等。艾滋病合并结核病患者的现状调查及管理。广西医学J]，2009,31（2）；240-241
[3]谈良谨. 控制与HIV 相关结核病的新策略. 国外医学·流行病学传染病学分册, 1994, 21: 196.
[4]2005年中国艾滋病疫情与防治工作进展[ EB/OL] .[ 2006-12-01] .http: / /www.unchina.org/unaids /.
作者简介：汪亚玲，女，教授，本科
通讯作者：苏俊华
【关键词】 免疫缺陷，HIV，结核分枝杆菌；一线抗结核药物，BACTEC MGIT 960
Mycobacterium Tuberculosis Infection in HIV Patients Analysis
WANG Ya-ling1, SU Jun-hua1
（Department of Laboratory Medicine, Third Municipal People’s Hospital, Kunming 650041,China）
【Abstract】 ObjectiveTo understanding of HIV patients with Mycobacterium Tuberculosis infection. MethodUse acid-fast staining and BACTEC MGIT 960 to detect specimens. BACTEC MGIT 960 is the final diagnosis. The confirmation of TB infected patiens for drug susceptibility testing(Include Streptomycin、Isoniazid、Rifampin、Ethambutol、Pyrazinamide). Result Eight cases are non-tuberculosis Mycobacterium infection in 203 of HIV-Infected patients. In patients with tuberculosis drug susceptibility ,85.17% sensitive 、7.14% MDR 、7.14% XDR. Conclusion HIV infectiong in our hospital patients are still sensitive to first-line drugs for tuberculosis.
【Key words】 Acquired immunodeficiency syndrome ,HIV, Mycobacterium Tuberculosis, first-line drugs of tuberculosis, BACTEC MGIT 960
近年来结核分枝杆菌感染病人发病人数有所回升，对抗结核药物耐药情况也十分严重。免疫缺陷病人易并发各种机会感染，结核是较常见的。而且随着HIV感染病例数逐年增加，使其也成了结核分枝菌耐药的因素之一。我院为艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染与结核人定点收治医院，结合本院的资源，整合检验科现有的检测技术，为进一步了解HIV感染合并结核病人耐药情况，对此我们做了以下研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1病例来源收集自2010年2月至2011年7月HIV感染病人的送检标本，包括痰液、支刷物、肺泡灌洗液、胸水、腹水、脑脊液、尿液、脓液及其他标本等。
1.1.2 仪器和试剂 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪及其配套试剂（包括MGIT培养管，MGITOADC营养添加剂、PANTA 杂菌抑制剂，SIRE联合药敏，PZA药敏试剂和PZA培养管）由美国BD公司生产；标本前处理液2% NaLC-NaOH、PH 6.8 PBS缓冲液、抗酸染液、革兰染液自配；改良中性罗氏培养基由郑州贝瑞特生物技术有限责任公司生产；结核分枝杆菌抗原检测试剂（胶体金法）由杭州创新生物检验技术公司生产,；TB-DNA检测由本院检验科PCR室协助完成（仪器：Roche LightCycler，试剂：结核分枝杆菌核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒，由中山大学达安基因股份有限公司生产）。
1.2 方法抗酸涂片和BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪対送检的标本进行检测。 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌检测系统按其操作指南操作。取制备好的接种液0.5 ml接种于MGIT培养管，同时取沉渣0.2 ml接种中性罗氏培养基，并进行涂片，待涂片干燥后进行抗酸染色，统计其初始涂片阳性率。
1.3 药敏试验采用比例法，同样由BACTEC MGIT 960完成，药敏操作按照BACTEC MGIT 960操作指南完成，BACTEC MGIT 960提供链霉素（Streptomycin,S）、异烟肼（Isoniazid,I）、利福平（Rifampin,R）、乙胺丁醇（Ethambutol,E）和吡嗪酰胺（Pyrazinamide,PZA）五种抗结核一线药，药物终浓度分别为1.0 ug/ml、0.1 ug/ml、1.0 ug/ml、5.0 ug/ml、100 ug/ml。药敏质控株H37RV。
1.4 结果判断及处理 BACTEC MGIT 960检出阳性后,取阳性培养管做抗酸染色和革兰氏染色，以确定是否为分枝杆菌。若抗酸染色阳性，视为分枝杆菌生长；抗酸染色阴性标本需再经过革兰氏染色确定有无其他细菌、真菌生长，如有即视为标本污染。中性罗氏培养基放置在37.0℃ 5% CO2孵育箱中孵育，每周观察两次，若发现可疑菌落，处理及判断同BACTEC MGIT 960培养。两者检测周期均为42天，42天无生长视为培养阴性。
1.5 菌型鉴定 首先涂片证实为分枝杆菌生长，取阳性管中培养物100ul，加于胶体金检测条中，15分钟观察结果，阳性说明为结核分枝杆菌，若检测结果为阴性，PCR TB-DNA证实仍为阴性，判为非结核分枝杆菌。
2 结果
2.1 病人基本情况所有送检的病人年龄平均38.19岁；BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪检培养阳性的男性与女性人数分别为30人和7人，其中非结核分枝杆菌阳性的均为男性；28例药物敏感性试验中男性病人21例，7例为女性。
2.2 阳性检出情况感染HIV病人共送检203 份标本，BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪检出结核分枝杆菌阳性标本60份，阳性检出率29.56%（60/203），其中结核分枝杆菌阳性标本为50例，阳性检出率24.63%（50/203）；检出8份标本为非结核分枝杆菌，阳性检出率3.94%（8/203）。抗酸涂片分枝杆菌阳性检出率18.23 %(37/203)。来自于非艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染病人的阳性检出率为36.51%（747/2046）。
2.3 药敏试验结果50份结核分枝杆菌确诊病人中由于同时送检一份以上标本、病人出院等原因，只对28份单株结核分枝杆菌阳性标本做了结核药物敏感性试验，有85.71%（24/28）人药敏结果五种一线抗结核药物全部敏感；MDR（同时对利福平和异烟肼耐药）有 7.14%（2/28）；7.14%(2/28)为耐多药。
3 讨论
根据本次研究203例送检的艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）（PLWHA）感染病人，有29.56%的结核分枝杆菌感染与艾维莉的研究[1]一致，高于汤卓的研究结果19.4%（151/778）。在3.94%非结核分枝杆菌感染。28份单株结核分枝杆菌阳性标本做了结核药物敏感性试验，有85.71%（24/28）人药敏结果五种一线抗结核药物全部敏感的结果，本院收治的PLWHA病人使用一线抗结核药物治疗可以达到治愈结核分枝杆菌感染的目的。
但据2005年最新评估显示, 目前中国现有PLWHA约65万人[3]。艾滋病患者由于机体免疫力降低, 容易通过内源性复燃、外源性感染或再感染患结核病, HIV 感染能够影响结核病的发展和转归, 而结核病感染又可加剧HIV 感染的病程。在发展中国家, 结核与HIV/ AIDS 双重感染的增高趋势比较明显, 被认为是发展中国家HIV 感染者最常见的机会性疾病, 常是免疫缺陷的第一个临床症状[4]。所以随着PLWHA人数在不断的增加，合并结核与非结核分枝杆菌的病人数量也在增加，又由于非结核分枝杆菌病人对抗结核药物天然耐药，结核耐药情况艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的病人做分枝杆菌培养及菌型鉴定非常重要，关系到艾滋病（AIDS）和人类免疫缺陷病毒（HIV）感染病人的生活质量与减少抗结核分枝杆菌耐药情况的发生。
参考文献
[1]艾维莉. 艾滋病与结核病双重感染的研究概况[ J ]. 内科, 2007, 2( 4 ) : 604- 606.
[2]汤卓，黄绍标, 韦彩云,等。艾滋病合并结核病患者的现状调查及管理。广西医学J]，2009,31（2）；240-241
[3]谈良谨. 控制与HIV 相关结核病的新策略. 国外医学·流行病学传染病学分册, 1994, 21: 196.
[4]2005年中国艾滋病疫情与防治工作进展[ EB/OL] .[ 2006-12-01] .http: / /www.unchina.org/unaids /.
作者简介：汪亚玲，女，教授，本科
通讯作者：苏俊华