【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA（LncRNA）母系表达基因3（MEG3）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法 取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）,均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染（LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir）组、共转染阴性
【机 构】
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长江大学附属仙桃市第一人民医院眼科
【基金项目】
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长江大学2019年度医学科研资助项目（编号：WJ2019-62）；
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目的 探讨长链非编码RNA（LncRNA）母系表达基因3（MEG3）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法 取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）,均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染（LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir）组、共转染阴性对照（LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒）组，采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型，25 mmol·L-1葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液，对照组细胞以正常培养基培养，将大鼠与细胞均分组进行处理，以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后，通过伊文思蓝（EB）检测大鼠视网膜血管通透性；TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率；EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况；依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β含量；实时荧光定量PCR实验检测HRMEC及大鼠视网膜组织miR-145-5p表达；蛋白免疫印迹法检测HRMEC及大鼠视网膜组织凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax）表达；双荧光素酶实验验证HRMEC中LncRNA MEG3对miR-145-5p的靶向调节作用。结果 LncRNA MEG3过表达组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;miR-145-5p agomir组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。LncRNA MEG3过表达组HRMEC增殖率均高于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;miR-145-5p agomir组HRMEC增殖率均低于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。LncRNA MEG3过表达组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均低于模型组、共转染组，Bcl-2表达均高于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;miR-145-5p agomir组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均高于模型组、共转染组，Bcl-2表达均低于模型组、共转染组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3过表达质粒组细胞相对荧光素酶活性（0.33±0.05）低于转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3空载质粒组（1.02±0.21）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 LncRNA MEG3可通过靶向下调miR-145-5p表达，抑制炎症反应，减轻DR大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡，促使HRMEC DR细胞模型存活，改善DR大鼠视网膜血管屏障功能。
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