【摘 要】
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目的利用酵母双杂交方法,筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7
【机 构】
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安徽医科大学基础医学院生化与分子生物学教研室,安徽医科大学药学院,安徽医科大学省部级基因研究重点实验室病原生物学教研室
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目的利用酵母双杂交方法,筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母AH109菌株中,检测诱饵载体有无毒性和自激活作用,利用酵母双杂交系统从人胚胎脑cDNA文库中筛选与ROP18相互作用的宿主蛋白。结果构建了诱饵载体pGBKT7-ROP18,ROP18具有自激活功能。用ROP1825-25lan为诱饵,筛选获得一系列与ROP18相互作用的宿主蛋白:DNA损伤特异性结合蛋白1（DDB1）、torsin A相互作用蛋白1（TOR1AIP1）、整联蛋白β1（integrinβ1）、溶质运载蛋白3（SLC3A2）、酪氨酸硫化转移酶2（TPST2）、Derl样域家族成员2（DERL2）和OCIA结构域蛋白1（OCIAD1）。结论通过酵母双杂交技术筛选出与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的多种宿主蛋白。
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