【摘 要】
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基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队; 山东省寿光市畜牧兽医局;
【基金项目】
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国家公益性行业(农业)科研专项(201303033);国家自然科学基金(31502088)
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基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技术,将LaSota的F基因编码区(CDS)替换为基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因CDS,并将替换后的F蛋白的裂解位点突变为LaSota的裂解位点,构建重组质粒pNDFLsp-mF。将pNDFLsp-mF与表达NP、P和L蛋白的辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞,拯救获得表达基因Ⅶ型NDV F蛋白的重组病毒(rLaSota-mF)。生长曲线结果显示,与LaSota相似,rLaSota-mF能够在鸡胚中有效复制,病毒滴度EID50为109.375/0.1 mL。生物学特性测定结果显示rLaSota-mF的MDT为144.6 h,表明其为低毒力病毒株。将拯救获得的病毒连续传15代后所替换的基因及突变的位点能够在r LaSota-mF中稳定存在。本研究为研究与开发针对NDV不同基因型流行病毒株的疫苗奠定基础。
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