MultiSiteGateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用

来源 :中国医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：feiniao6688

【摘要】

：

目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板，PCR扩增EBL-3u和EBL-5U1、EBL-5U2＋EBL．off同源臂片段，利用MuhiSiteGateway技术，完成若干DN

【作者】

：

王各各李娇娜杜峰邓舒梁佳元曹雅明罗恩杰

【机构】

：

中国医科大学基础医学院免疫学教研室,沈阳市中医药学校基础教研室,中国医科大学基础医学院病原生物学教研室

【出处】

：

中国医科大学学报

【发表日期】

：

2012年12期

【关键词】

：

疟原虫质粒基因打靶 MultiSite GATEWAY技术 Plasmodium plasmid gene targeting multisite g

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目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板，PCR扩增EBL-3u和EBL-5U1、EBL-5U2＋EBL．off同源臂片段，利用MuhiSiteGateway技术，完成若干DNA片段的定性重组，构建打靶载体pCHD-EBL-RFT，并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4—5U片段，置换质粒PbUIS4／flp中原有同源臂，并通过位点特异突变技术，获取AvrlI和NheI两种线性化位点，构建插入载体PyUIS4／flp。结果构建出打靶载体pCHD—

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